《miRNA在兒童急性淋巴細胞白血病GC反應性中的作用研究》是依託中山大學，由歐陽涓擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miRNA在兒童急性淋巴細胞白血病GC反應性中的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：歐陽涓
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
糖皮質激素(GC)是兒童急淋的主要治療手段之一，而白血病細胞對GC 的敏感性與治療效果和預後密切相關。目前臨床上一直無法在患者使用GC前對GC反應性做出判斷。我們前期研究提示在不同GC反應性ALL患兒GC受體（GR）mRNA水平未見不同，但存在GR轉錄活性的不同；小規模miRNA表達譜篩查提示存在miRNA的差異表達。本項目擬：首先對GC反應性相關的miRNA進行確認，著重研究miRNA和GR的相互作用,進一步深入探討GC抵抗的分子生物學機制，為診斷、逆轉GC抵抗提供新的靶點；另一方面，著手建立GC抵抗的體外分子診斷方法，為臨床早期診斷和評估患者的GC反應性、確立個體化治療方案提供可靠的技術、方法，從而實現GC的個體化醫療。
結題摘要
兒童急性淋巴細胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）是兒童中發病率最高的惡性腫瘤。雖然糖皮質激素（glucocorticoid，GC）是一線治療藥物，但是患兒個體反應的差異性限制了GC的臨床運用。已經公認對GC治療是否敏感是判定小兒ALL預後的一項強烈的、具有獨立意義的指標。因此，了解GC抵抗的機理、尋找能夠逆轉GC抵抗或能與GC協同作用而克服ALL細胞對GC抵抗的方法，是進一步提高兒童ALL治癒率的重要途徑。近期研究提示microRNA（miRNA）在GC抵抗中發揮了重要的調控作用。通過研究不同GC反應性的ALL患兒中miRNA的差異表達及其如何影響GC反應機制、如何逆轉GC抵抗，以期能夠建立GC抵抗體外分子診斷方法並為探索GC抵抗治療靶點奠定基礎。方法：收集了67例兒童ALL骨髓標本，其中52例GC敏感患兒骨髓樣本和15例ALL GC抵抗患兒骨髓樣本。採用μParaflo微流體晶片進行差異miRNA表達譜分析；以qRT-PCR驗證差異miRNA；用差異miRNA mimic/inhibitor 轉染急淋細胞株，流式細胞術檢測細胞對GC誘導凋亡的變化；螢光素酶報告基因系統檢測差異miRNA與GC信號分子特異的靶對關係。並採用qRT-PCR、Western Blot等方法在不同GC反應的ALL患兒及急淋細胞株中檢測miRNA的表達及NR3C1基因及GR蛋白的表達情況。結果：在所檢測的2555個人類miRNA中，相較於GC敏感ALL患兒，GC抵抗的ALL患兒顯著上調的差異miRNA共22個，顯著下調的miRNA共21個。qRT-PCR驗證了與GC信號通路相關的3個miRNA的差異表達，與晶片結果一致。GR蛋白在GC敏感細胞及GC敏感ALL患兒中呈高表達，而在GC抵抗細胞/GC抵抗患兒中呈低表達；轉染miRNA15b mimic，可以引起NR3C1及GR蛋白的增加以及GC誘導細胞凋亡增加（P＜0.01），而miRNA15b inhibitor的轉染減少了NR3C1及GR蛋白的表達以及GC誘導凋亡（P＜0.05）。靶對實驗證實了miRNA15b對GC信號通路分子有著轉錄後調控的作用。結論：miRNA15b可能成為今後臨床早期診斷和評估患者的GC 反應性的新指標，該研究也為逆轉GC抵抗提供了新思路，為臨床實現GC的精準醫療奠定基礎。
