《miR424和miR424*在法洛氏四聯症中的角色及作用機制研究》是依託復旦大學，由張進擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR424和miR424*在法洛氏四聯症中的角色及作用機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張進
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
法洛氏四聯症是一種嚴重的先天性心臟病，目前發病機制不明。微小RNA（miRNA）是內源性小RNA分子，負調控基因的表達，參與生物體的發育。研究顯示miRNA在心臟發育過程中具有重要作用，但未確定哪些miRNA參與了先天性心臟病的發生。我們套用miRNA晶片檢測了法洛氏四聯症患者心臟組織，獲得了miRNA異常表達譜，進一步驗證後發現miR424及與其來自於同一前體的miR424*在法洛氏四聯症患者心臟組織中表達顯著升高，並下調多個與心臟發育相關的靶基因表達。本課題擬計畫：1.體外分析miR424及424*表達變化對心肌分化以及心肌細胞功能的影響；2.製備Cre誘導表達的miR424基因座位轉基因小鼠，分析其對小鼠心臟發育以及心臟功能的影響；3.確定miR424及424*調控的關鍵靶基因。通過本研究，期望能夠確定miR424及miR424*在心臟發育的地位，闡明兩者在法洛氏四聯症中的作用機制。
結題摘要
在本基金資助下，本課題研究了法洛氏四聯症異常表達微小RNA miR-424/424*和miR-222在體外和體內對心臟發育的影響。研究表明，miR-424/424*的上調顯著促進原代胎鼠心肌細胞的增殖，並抑制細胞的遷徙，但其上調不會影響P19細胞向心肌細胞分化；miR-424/424*可以顯著抑制心臟發育相關基因NF1、HAS2以及PAX3的表達，並在臨床法氏心肌樣本中這些基因的表達顯著降低。根據課題設計，我們製備了miR-424/424*的Cre誘導表達小鼠，通過該轉基因小鼠與心臟特異表達Cre的NKX2.5-Cre小鼠雜交，在心臟中提高miR-424/424*表達約2倍，但後續的實驗發現該miRNA的上調，未導致心臟發育的形態異常，可能機體存在一定的適應性調控機制，單獨的miR-424/424*上調並不足以導致心臟發育的異常。miR-222在法氏患者心臟組織中也呈高表達，我們的研究發現miR-222可促進胎鼠原代心肌細胞增殖，對遷移無影響；miR-222可直接抑制ZFPM2的表達，進而抑制心肌分化maker GATA4的表達；斑馬魚中，miR-222的上調，可導致心臟環化和心室壁變薄，並抑制ZFPM2和GATA4的表達下調。總之，在本基金的資助下，我們發現miR-424/424*和miR-222在體外可以影響原代胎鼠心肌細胞的增殖、遷移以及心肌細胞分化，並作用於多個心臟發育相關基因，且miR-222的上調可以導致斑馬魚心臟形態發育的異常。另外，在本課題資助下，培養研究生2名，目前已畢業一人。發表SCI論文一篇，另有一篇在整理中。
