《miR146a-PAK6調控前列腺癌細胞微絲骨架與遷移運動的分子機制》是依託中山大學，由溫星橋擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR146a-PAK6調控前列腺癌細胞微絲骨架與遷移運動的分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：溫星橋
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
微絲骨架是前列腺癌等惡性腫瘤細胞發生遷移與運動的結構基礎。最近研究表明miRNA可抑制惡性腫瘤的轉移，且具有新優勢，但其分子機制未明。我們已經證實，PAK6參與調控前列腺癌細胞骨架及侵襲能力（Wen XQ，Urology,2009,73:1407-11）。本課題擬通過螢光素酶報告基因分析、激酶試驗、RNA干擾等方法，通過分子、細胞及動物體內miRNA實驗等,進一步探討在HGF、Heregulin等外源性生長信號的刺激下，miR-146a如何調控PAK6介導的細胞骨架重構、應力纖維分布、偽足與膜皺褶形成、遷移能力改變、絲切蛋白（Cofilin）磷酸化，以及與轉移相關的JNK/MMP9信號通路的機制。旨在從細胞骨架的角度，為臨床開發miRNA治療前列腺癌轉移提供新的分子靶點與實驗依據。
結題摘要
在本基金項目支持下，我們開展PAK6與前列腺癌轉移的相關研究，順利完成研究任務，成果如下： （一）分子生物學研究 通過生物信息學預測PAK6是miR-23a的靶基因，進一步通過Real-time PCR、Western blot實驗及螢光素報告酶實驗，證實PAK6是miR-23a的靶基因。體外實驗前列腺癌細胞系轉染miR-23a後PAK6 mRNA表達量無明顯減少，而PAK6蛋白表達量減少，說明miR-23a不影響PAK6基因的轉錄。通過Western blot實驗檢測發現前列腺癌細胞轉染miR-23a後，LIMK1、Cofilin表達無明顯變化，而p-LIMK1、p-Cofilin表達分別比對照組下降60%、70%，提示了miR-23a~PAK6~LIMK1~Cofilin信號通路的存在。進一步通過免疫螢光共定位、免疫複合物共沉澱實驗（Co-IP）及激酶實驗，證明PAK6與LIMK1直接相互作用。 （二）細胞學研究 在前列腺癌細胞系分別轉染miR-control、miR-23a及siPAK6，通過雷射共聚焦顯微鏡觀察發現miR-23a組及siPAK6組細胞骨架應力纖維均明顯減少，肌動蛋白皺縮，表明轉染miR-23a後細胞骨架發生重構，細胞運動受抑制。體外遷移及侵襲實驗示，轉染miR-23a組遷移及侵襲的細胞數較對照組明顯減少。提示轉染miR-23a引起前列腺癌細胞侵襲及轉移能力下降。同時過表達miR-23a與PAK6後，miR-23a所引起的效應均被逆轉。 （三）動物實驗 成功構建miR-23a及其海綿載體慢病毒細胞株，裸鼠原位注射穩定表達Luc-miR-23a及Luc-miR-control的前列腺癌細胞，建立動物模型。注射後每周行螢光活體成像，8周后處死小鼠。活體成像檢測中證實miR-23a可以減弱小鼠體內前列腺癌的轉移。 （四）臨床前列腺標本及預後分析 人前列腺癌組織染色、原位雜交檢測miR-23a；免疫組化檢測PAK6表達。分析miR-23a/PAK6表達與臨床生存率及預後關係，提示miR-23a的高表達與臨床患者預後較好相關。 （五）較高濃度ROS可通過TAP與JNK信號通路交聯促進PCa凋亡（Int J Cancer， Lab Invest）
