miR-99a在兒童AML中的表達和功能研究

《miR-99a在兒童AML中的表達和功能研究》是依託中山大學，由羅學群擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：miR-99a在兒童AML中的表達和功能研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：羅學群
• 依託單位：中山大學

中文摘要

近年研究表明, miRNA與白血病發生髮展及預後密切相關，但僅部分白血病相關miRNA被鑑定，其作用及機制也遠沒被闡明。我們前期對99例小兒白血病研究發現，MiR-99a在小兒AML中表達明顯增高,平均為正常對照的9.2倍。計算機分析其預測靶基因有41個，其中與白血病細胞分化和凋亡相關的有5個。推測 miR-99a可能通過沉默其靶基因,在AML發病中起類似癌基因作用。本項目擬通過體內（研究 miR-99a與小兒AML分型、臨床表現、診治及預後關係）和體外實驗（在AML細胞株或小兒AML白血病細胞中上調或下調其表達，檢測細胞增殖、凋亡情況及對分化影響），闡明miR-99a在小兒AML發病中作用。並通過分析與預測靶基因的相關性，闡明miR-99a的作用機制。該項目完成不僅對揭示白血病中RNA調控網路具有重要意義，而且為白血病診治及預後分析提供新的理論依據，為白血病治療提供新的靶標。

結題摘要

近年研究表明，miRNA與白血病的發生、發展及預後密切相關，但僅部分白血病相關miRNA被鑑定，其作用和機制也遠沒被闡明。我們前期對99例小兒白血病骨髓標本用基因晶片分析miRNA的表達譜，發現miR-99a在小兒急性髓細胞白血病（AML）中表達明顯增高，平均為正常對照的9.2倍，但其在兒童髓系白血病中的作用及調控機制未明。為此，本研究首先用PCR驗證基因晶片的結果，證實miR-99a在所有AML（M1-5）（n=23）和慢性粒細胞白血病（CML）（n=4）初診患者骨髓樣本中高表達，而在91%的AML（n=23）和所有CML（n=4）緩解患者骨髓中呈低表達（p＜0.05），其水平降至與正常對照組相似；通過lipo2000瞬時轉染，miR-99a高表達促進髓系白血病細胞株HL60和K562細胞增殖（MTT實驗），抑制凋亡（雙染凋亡實驗）；生物學信息方法[TARGETSCAN（http:// www. targetscan.org/），PICTAR（pictar.mdc-berlin.de/）生物學軟體]預測miR-99a可能調控的靶基因，共有41個，通過文獻檢索，發現與白血病細胞分化和凋亡相關的有5個：TRIB2、CTDSPL、Hoxal、RAC-1、MCL-1；在293T細胞，通過雙螢光報告Lipo轉染實驗，初步驗證在上述5個預測的基因中抑癌基因CTDSPL和TRIB2是miR-99a靶基因，進一步在K562細胞，採用電轉染雙螢光報告實驗再次驗證CTDSPL和TRIB2是miR-99a的靶基因；Western blot分析顯示，在HL60和K562細胞，通過轉染使miR-99a高表達可抑制CTDSPL和TRIB2的表達，而在AML患者骨髓細胞，87%和74%的初診患者CTDSPL和TRIB2低表達，58%和69%的緩解患者CTDSPL和TRIB2高表達，說明大多數患者CTDSPL和TRIB2的表達受miR-99a調控。本研究首次顯示，miR-99a在兒童AML和CML中異常高表達，起原癌基因的作用，機制之一是下調其靶基因CTDSPL和TRIB2（抑癌基因）而發揮作用；提示AML和CML這兩種不同的髓系白血病可能在疾病的發生和發展過程中存在一些共通的生物學機制，值得進一步研究；miR-99a可能是一個有前途的治療兒童髓系白血病的靶標。