基本介紹
- 中文名：miR-502與其靶基因SET8在乳腺癌中的功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉奔
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
乳腺癌是女性發病、死亡第一位惡性腫瘤，其病因與環境暴露，基因多態性和表觀遺傳學因素有關。本研究組前期大規模流行病學研究發現，組蛋白特異性甲基轉移酶SET8的3'-UTR的一個SNP位點與乳腺癌發病風險相關。而此SNP位點恰好位於與miR-502相結合的靶序列上。為深入研究miR-502與其靶基因SET8在乳腺癌發病機制中的作用，擬利用分子生物學，生物化學和細胞生物學方法驗證SET8與miR-502之間的相互作用，明確SET8多態性對miRNA結合的影響。通過功能獲得（過表達）和功能缺失（失表達）相結合的方法，初步闡明miR-502與靶基因SET8在乳腺癌中的功能。在功能研究基礎上，通過流行病問卷調查方式分析各種環境因素對乳腺癌發病的影響，進一步明確SET8變異與環境因素互動作用和乳腺癌易感性的關係。
結題摘要
乳腺癌是女性發病、死亡第一位惡性腫瘤。本研究在前期大規模人群研究實驗基礎上開展，本研究首先驗證了SET8與miR-502之間的相互作用，並進一步研究了miR-502對乳腺癌細胞增殖，細胞周期，遷移和侵襲的影響。同時miR-502過表達可以下調p53的表達。與癌旁組織相比，SET8及miR-502在乳腺癌的表達顯著下調。同時SET8表達與miR-502的表達呈負相關。對82例乳腺癌病例的SET8和miR-502的表達進行了檢測，結果發現SET8不同基因型的mRNA表達水平不同。選取不同基因型（CC， CT，TT）的標本，進行了SET8蛋白表達水平的檢測，結果發現SET8 CC基因型的蛋白表達發生缺失（85.7%），提示CC基因型與miR-502可能結合，在翻譯水平被調控，發生蛋白表達的下調或抑制。分別克隆了SET8 野生型和突變型的螢光素酶報告基因載體，並進行了雙酶切和測序驗證分別轉染乳腺癌細胞系MCF7和MDA-231，利用promega雙螢光報告基因金冊試劑盒進行檢測，顯示在MDA-231中，SET8野生型（CC）與miR-502結合，而突變型不結合。細胞周期實驗檢測miRNA-502過表達和抑制對乳腺癌細胞系MCF7細胞周期的影響，結果顯示miR-502過表達使細胞阻滯於G1期。過表達miR-502 時，觀測到過表達miR-502 mimic可以明顯促進MDA-MB-231細胞的遷移和侵襲（P＜0.05）。而抑制miR-502表達可以檢測到明顯的遷移和侵襲抑制。MTT實驗發現過表達miR-502 mimic與對照組相比可以明顯促進細胞的增殖，而轉染miR-502 inhibitor 可以明顯抑制乳腺癌細胞增殖，在兩種細胞系中可觀察到相同的趨勢。細胞劃痕試驗顯示過表達miR-502 可以明顯促進細胞遷移。在兩種乳腺癌細胞系中可觀察到相同的趨勢。研究結果提示，miR-502在乳腺癌中作為抑癌基因通過調控SET8基因的功能而影響乳腺癌的發生髮展。本研究為揭示乳腺癌發病機制，尋找乳腺癌新的治療靶標奠定了基礎。
