《miR-31靶向調控刺參腐皮綜合症發生的分子機制研究》是李成華為項目負責人，寧波大學為依託單位的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-31靶向調控刺參腐皮綜合症發生的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李成華
- 依託單位：寧波大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
在已完成的國家自然科學基金的資助下，申請人證實了miR-31參與了刺參腐皮綜合症發生的免疫應答過程，但對於該調控分子是如何被病原激活的？其調控的靶基因又如何介導刺參的防禦機制等科學問題不甚明確。本項目擬通過構建刺參基因組文庫，克隆刺參miR-31基因上游調控序列，識別和鑑定關鍵調控元件回響病原感染的方式或途徑。隨後融合高通量轉錄組測序、雜交PCR、基因定量表達分析和雙螢光素報告測定等手段篩選和鑑定刺參體腔細胞miR-31的靶基因；進而在個體和培養體腔細胞兩個層次上功能確認miR-31靶向調控的目標基因3個以上。最後，闡明miR-31和靶基因異常表達對刺參體腔細胞吞噬、凋亡、呼吸爆發或自噬等細胞免疫指標的影響，初步掌握miR-31介導的刺參免疫應答調控途徑，為從根本上控制刺參腐皮綜合症發生提供新思路。
結題摘要
本研究構建了miR-31過表達或抑制表達不同時間點（12h、24h）刺參體腔細胞高通量轉錄組文庫，發現36個unigene在不同時間點均呈現一致表達，表明其可能為miR-31的靶基因。為明確miR-31和靶基因的調控關係，我們建立了刺參個體和體外培養細胞兩個層次上的miRNA和靶基因功能鑑定體系，證實了miR-31通過靶向雙功能分子CTRP9調控脂代謝進而介導細胞凋亡的過程。確立了miR-31靶向Ajp105基因調控呼吸爆發的分子過程；構建了刺參基因組文庫四個，利用基因組步移方法分別獲得了刺參精氨酸代謝的NOS、arginase和agmatinase等3個關鍵基因的5’調控序列。發現當截短的AjNOS的-375 bp到-366 bp是NF-κB的關鍵結合位點，正調控NOS基因轉錄。同時發現共轉染NF-κB/Rel或STAT5後，轉染有截短的arginase啟動子報告基因的螢光素酶轉錄活性顯著降低，而共轉染各截短的agmatinase啟動子質粒的雙螢光素酶活性都無明顯變化。藉助啟動子克隆和雙螢光素報告測定，闡明了轉錄因子MYC通過結合Bax啟動子序列的第一個E-box序列調控Bax表達，進而促進病原脅迫的刺參體腔細胞凋亡的分子過程.
