《miR-24調控PAK4/LIMK-1對卵巢癌細胞增殖、侵襲及預後的機制研究》是依託浙江大學，由周建維擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-24調控PAK4/LIMK-1對卵巢癌細胞增殖、侵襲及預後的機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：周建維
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
卵巢癌死亡率高居婦科惡性腫瘤之首，如何抑制卵巢癌細胞增殖及侵襲是提高其預後的重要途徑之一。微小RNA（microRNA）作為一種轉錄後調節因子，參與細胞增殖和腫瘤侵襲，並早期釋放入血。我們前期研究發現miR-24在卵巢癌患者表達改變，並可調節卵巢癌細胞的周期，癌組織內侵襲相關因子磷酸化蛋白激酶4（PAK4）和LIMK-1表達亦增加。結構生物信息學提示miR-24可作用於細胞骨架調節蛋白PAK4，繼而調控LIMK1/cofilin通路而抑制細胞遷移來降低卵巢癌細胞增殖侵襲潛能。為此本研究擬檢測不同臨床分期及治療方案的卵巢癌患者miR-24表達並隨訪，研究其對預後的診斷價值，同時建立miR-24上調和下調錶達的卵巢癌細胞株和裸鼠動物模型，通過體內外實驗研究不同miR-24水平對卵巢癌細胞增殖、侵襲以及調控PAK4/LIMK-1分子信號通路的作用，以期為卵巢癌治療及預後預測提供新的思路與方法。
結題摘要
上皮性卵巢癌作為致死率最高的婦科腫瘤，晚期患者的5年生存率不到30%。lncRNA和 miRNA是兩類常見的非編碼RNA，參與轉錄調控、細胞增殖、分化等多種生物學過程，在腫瘤相關的基因調控系統中扮演著關鍵的角色。在本研究中，我們首先利用基因晶片檢測發現LINC01088在良性上皮性卵巢腫瘤中的表達較正常卵巢上皮組織中明顯減少，並且在42個臨床樣本中進一步得到了驗證，且在上皮性交界性和惡性卵巢腫瘤中的表達量下降更加明顯。為了確認LINC01088在上皮性卵巢腫瘤發生中的角色，我們構建過表達LINC01088的慢病毒載體並建立高表達LINC01088細胞系，進一步的動物致瘤實驗表明表達LINC01088能抑制動物移植瘤的生長。接著我們通過臨床樣本相關性分析和RNA共沉澱方法驗證了miR-24-1-5p是LINC01088作用的靶點，提示LINC01088可能是通過miR-24-1-5p而抑制細胞生長的。接著，我們建立了穩定表達miR-24-1-5p的A2780細胞系進行了細胞增殖實驗、細胞遷移實驗以及皮下移植瘤實驗，結果表明表達miR-24-1-5p在體內外均能促進細胞增殖，而LINC01088能削弱表達miR-24-1-5p對細胞的促增殖作用，但表達miR-24-1-5p並不促進細胞的遷移。最後我們還通過報告基因和WB方法驗證了PAK4是miR-24-1-5p下游靶蛋白，且細胞增殖實驗提示表達PAK4顯著抑制細胞的增殖，而細胞遷移實驗表明過表達PAK4能增強細胞遷移能力。通過本研究培養碩士研究生4名，申請專利1項（審批中），已發表SCI論文2篇，已發表國核心心期刊論文1篇，已收錄SCI論文1篇，在投SCI論文2篇（1篇已修回）。
