《miR-200c協同B16F10/mIL-21-GPI瘤苗降低黑色素瘤EMT並抑制其轉移研究》是依託東南大學，由趙楓姝擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-200c協同B16F10/mIL-21-GPI瘤苗降低黑色素瘤EMT並抑制其轉移研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：趙楓姝
- 依託單位：東南大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
黑色素瘤高轉移性是致死主要原因。我們前期研究顯示IL-21-GPI黑色素瘤苗可增強免疫鼠細胞免疫,對荷瘤鼠有顯著治療效應，但仍不能抑制其轉移。研究顯示miR200c可抑制腫瘤細胞EMT。據此，本研究基於IL-21-GPI瘤苗免疫效應和miR200c表觀遺傳調節作用，探討瘤苗和miR200c逆轉黑色素瘤易轉移的分子機制,為其根治提供新研究策略。首先以具有調節細胞增殖與凋亡、減低ZEB1表達的miR200c轉染B16F10細胞，通過成球與克隆實驗、細胞遷移及致瘤性等實驗，評價miR200c對瘤細胞EMT的抑制作用；再以IL-21-GPI瘤苗免疫治療B16F10/miR200c攻擊所致的荷瘤鼠,檢測腫瘤生長及瘤組織中miR200c、ZEB1及TGF-beta水平等，考核IL-21-GPI瘤苗與miR200c協同抑瘤和阻斷瘤細胞EMT及轉移效應，該研究對根治黑色素瘤有創新意義及潛在的臨床套用價值。
結題摘要
1、研究背景 我們的前期研究顯示，表達GPI-IL-21的黑色素瘤瘤苗B16F10/GPI-IL-21可顯著增強小鼠細胞免疫功能，對荷瘤鼠有顯著治療效應，但仍不能完全抑制腫瘤轉移。目前的研究表明，腫瘤轉移與腫瘤細胞啟動EMT有關。最新的研究發現，miR200c可抑制腫瘤細胞EMT，ZEB1與觸發EMT有關，而IL-21可能具有抑制腫瘤細胞EMT的作用。因此本研究擬將瘤苗B16F10/GPI-IL-21與miR200c聯用，在瘤苗發揮抗腫瘤作用的同時，兩者共同抑制腫瘤細胞EMT，從而希望能徹底控制腫瘤轉移，同時進一步探討瘤苗的抗腫瘤機制。 2、研究內容 製備過表達miR200c的B16F10細胞，同時設敲除ZEB1的B16F10（B16F10/shZEB1）組作對照。分別以B16F10野生株、B16F10/shZEB1、B16F10/GPI-IL-21及B16F10/miR200c細胞攻擊瘤苗B16F10/GPI-IL-21免疫小鼠，觀察小鼠的成瘤率、生存時間、腫瘤體積及肺轉移率、肺內轉移結節數量等，同時檢測各組細胞體外培養時及體內形成的腫瘤組織內TGF-b、ZEB1、Vimentin、Smad7、E-cad和N-cad的表達，探討瘤苗B16F10/GPI-IL-21的抗EMT作用及與miR200c的協同作用。 3、重要結果 瘤苗免疫小鼠血清中IFN-g、IL-4和TNF-a明顯升高，而TGF-b則大幅下降；同時免疫鼠脾細胞的細胞毒效應也顯著增強。與瘤苗單獨使用相比，瘤苗與miR200c聯用可顯著抑制腫瘤在小鼠體內的生長，表現為小鼠成瘤率低，形成的腫瘤體積明顯小於其他組，荷瘤鼠生存期延長，同時肺轉移率及肺內轉移結節數均顯著下降。Western blot及免疫組化均顯示，小鼠腫瘤組織中TGF-b、ZEB1、Vimentin和N-cad的表達明顯減少，而Smad-7和E-cad的表達則得到了很大提高。ShZEB1與瘤苗聯用也可產生較強的抗腫瘤效應，但療效不及瘤苗與miR200c聯用組。 4、科學意義 研究結果表明，瘤苗的免疫作用與miR200c的表觀調控作用可產生協同作用，極大程度地抑制了黑色素瘤EMT的啟動，從而有效控制了黑色素瘤的形成和轉移，腫瘤生成率及轉移率極低。本研究通過調控miR-200c與ZEB1反饋環而影響黑色素瘤細胞生物學特性，為黑色素的根治提供了新
