《miR-200a/b/429簇在胃癌EMT環路CTNNB1/ZEB/CDH中的協同調控機制的研究》是依託天津醫科大學，由張慶瑜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-200a/b/429簇在胃癌EMT環路CTNNB1/ZEB/CDH中的協同調控機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張慶瑜
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
上皮細胞間質轉化(EMT)是腫瘤發生髮展的重要機制之一。部分miRNA簇因其在基因組位置上與EMT重要基因相近，因而在腫瘤的轉錄調控機制中存在相同性。本課題依據同一染色體上miR-200a/b/429簇轉錄調控的協同作用擬進行miR-200a/b/429簇在胃癌EMT環路CTNNB1/ZEB/CDH中的協同調控機制的研究。本研究擬採用定量PCR、免疫組化和原位雜交方法確定80例胃癌標本及癌旁組織中miR-200a/b/429簇成員與CTNNB1、ZEB、CDH的表達特徵；在細胞水平驗證miR-200a/b/429簇對CTNNB1、ZEB、CDH的協同調控作用並套用分子生物學方法對胃癌EMT進行評價；通過測量裸鼠皮下移植瘤生長速度驗證miR-200a/b/429簇對胃癌EMT調控與腫瘤生長的關係。本課題將為研究胃癌的發生髮展機制、尋找以miRNA簇為對象的治療靶標提供新思路。
結題摘要
上皮細胞間質轉化是上皮細胞來源的惡性腫瘤細胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學過程，在腫瘤的發生髮展過程中發揮重要作用。我們的前期研究已進行了基質金屬蛋白酶（MMP-9）基因的表達對胃癌細胞侵襲與遷移的影響，在研究中發現miR-200a通過作用於CTNNB1調控胃癌細胞EMT過程。我們的研究表明miR-200家族調控胃癌EMT環路CTNNB1/ZEB/CDH的變化。主要集中在以下3方面。1，與正常胃黏膜組織相比，胃癌中miR-200a/b/c明顯下調，WHOⅢ/Ⅳ級胃癌組織中miR-200a/b/c的表達低於WHOⅠ/Ⅱ級，ZEB1/ZEB2，N-caderin和β-catenin的表達明顯上調，而E-cadherin的表達明顯下調。miR-200a/b/c與ZEB1/ZEB2, N-cadherin和β-catenin呈負相關（P＜0.05）,miR-200a/b/c與E-cadherin呈正相關（P＜0.05），ZEB2蛋白與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、腫瘤分期呈正相關，E-cadherin蛋白與腫瘤級別成負相關。2，為了進一步明確miR-200a的靶基因，我們用TOP/FOP螢光素酶檢測β-catenin/TCF-4活性，發現miR-200a能下調β-catenin/TCF-4蛋白的表達水平，β-catenin的表達出現了細胞核向細胞漿的轉移。miR-200a的表達能使N-cadherin，β-catenin，Twist1和Snail2表達水平下調，且使細胞周期出現G0/G1期阻滯，細胞的侵襲能力減弱，抑制了胃癌細胞EMT過程。3，miR-200a能調控Wnt/β-catenin信號通路的活性。我們發現胃癌中miR-200家族的表達依賴於表觀遺傳學的調控。ChIP實驗結果顯示DNMT1與miR-200a/b/429的啟動子區結合，Co-IP實驗顯示DNMT1與EZH2兩者有相互作用的關係。敲低EZH2不僅影響了H3K27me3的甲基化，而且影響了DNMT1在miR-200a/b/429啟動子區的結合。敲低EZH2和DNMT1提高了miR-200a/b/429的表達。EZH2和DNMT1介導的對miR-200a/b/429的表觀遺傳學調控在胃癌的發生髮展發揮了重要作用。總之，miR-200a/b/429通過調控CTNNB1/ZEB/CDH的表達抑制了胃癌細胞的生長增殖
