miR-155調控急性肺損傷時肺微血管內皮細胞Cx40表達的實驗研究

《miR-155調控急性肺損傷時肺微血管內皮細胞Cx40表達的實驗研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由張金洲擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：miR-155調控急性肺損傷時肺微血管內皮細胞Cx40表達的實驗研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：張金洲
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

肺血管通透性增加是ALI發病中心環節。我們發現LPS誘導PMECs膜Cx40表達降低，導致肺血管通透性增加，誘發ALI。進一步研究發現Cx40表達降低的同時Cx40mRNA上調，提示Cx40表達在轉錄後受到調節。miR-155介導轉錄後基因沉默，抑制mRNA翻譯過程。Cx40mRNA是miR-155的預測靶基因，ALI時Cx40表達降低是否通過miR-155抑制Cx40mRNA翻譯過程實現的呢？本項目首先製備miR-155敲除小鼠，LPS誘導ALI模型，在體研究ALI時miR-155對Cx40表達和肺血管通透性的調節；其次，構建包含Cx40mRNA 3'UTR全序列的f-luc報告載體，套用細胞轉染、微陣列基因晶片、實時PCR等技術驗證Cx40mRNA是miR-155的靶基因；最後LPS誘導PMECs，研究miR-155是否通過間隙連線通道調節Cx40表達。以期為ALI防治提供新藥物靶點。

結題摘要

肺血管通透性增加是ALI發病中心環節。我們發現LPS誘導PMECs膜Cx40表達降低，導致肺血管通透性增加，誘發ALI。進一步研究發現Cx40表達降低的同時Cx40mRNA上調，提示Cx40表達在轉錄後受到調節。miR-155介導轉錄後基因沉默，抑制mRNA翻譯過程。生物信息學預測提示Cx40mRNA可能是miR-155的靶基因，ALI時Cx40表達降低是否通過miR-155抑制Cx40mRNA翻譯過程實現的呢？ 本項目首先LPS誘導野生小鼠ALI模型，發現LPS誘導後肺組織miR-155表達增加。分別敲除和過表達miR-155基因，LPS誘導後小鼠肺損傷程度減輕或加重。離體研究發現miR-155基因敲除後炎性介質TNF-a和IL-6表達將低。進一步通過小鼠骨髓移植，LPS誘導發現，ALI時miR-155主要來源於巨噬細胞，並發揮促炎作用。miR-155在LPS誘導急性肺損傷中的促炎作用在大鼠模型中也得到證實。 其次，建立LPS誘導大鼠ALI模型，發現miR-155敲除後肺微血管內皮細胞Cx40表達增加，而miR-155過表達後Cx40表達將低。接著構建包含Cx40 3’-UTR的報告基因，發現Cx40mRNA 3‘-UTR包含miR-155結合位點。進一步通過在體miR-155基因敲除大鼠ALI模型，發現miR-155基因敲除後，Cx40表達增加，肺血管通透性將低，肺損傷減輕。 最後LPS誘導巨噬細胞，研究miR-155對炎性因子SOCS-1的調節，發現SOCS-1是miR-155調控的靶基因。本研究證實miR-155抑制Cx40mRNA翻譯，引起 Cx40表達降低和血管通透性增加，導致ALI發病，為ALI防治提供新思路，為ALI防治提供新藥物靶點。本研究國核心心期刊已發表論文1篇，參加全國會議交流1篇，國外期刊已投稿SCI論文1篇，正在撰寫1篇，培養博士研究生1名。