《miR-130b靶向MSTN基因調節梅山豬肌內脂肪沉積的作用研究》是依託揚州大學，由潘士鋒擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-130b靶向MSTN基因調節梅山豬肌內脂肪沉積的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：潘士鋒
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肌內脂肪(IMF)含量是影響豬肉品質的最重要因素，在基因水平研究肌內脂肪生成的調控機理是改善豬肉品質的根本途徑之一。人、鼠上研究發現，MSTN對調節IMF沉積起重要作用。然而，MSTN在調控豬IMF沉積中的作用還不清楚。我們前期發現，miR-130b可減少梅山豬皮下脂肪沉積，並且通過生物信息學軟體預測顯示miR-130b與MSTN之間具有很強的靶向關係。然而，miR-130b能否靶向MSTN調控梅山豬IMF沉積還需要進一步研究。本研究首先通過雙螢光素酶報告基因系統、“過表達”和“干擾”等方法確認miR-130b與MSTN之間靶向關係，然後以肌內脂肪細胞為模型，重點研究miR-130b和miR-130b-MV介導MSTN對豬IMF沉積的調節作用。通過本研究可明確miR-130b所介導的MSTN對豬IMF沉積的調節作用，為進一步提高豬肉中IMF含量進而改善豬肉品質提供理論依據。
結題摘要
肌內脂肪(IMF)含量是影響豬肉品質的最重要因素之一。在基因水平上研究豬肌內脂肪生成的調控機理是改善豬肉品質的根本途徑之一。本研究以新生梅山仔豬背最長肌源肌內脂肪細胞去分化的DFAT細胞為模型，在誘導分化的同時進行不同濃度的重組人MSTN蛋白(0，25，50和100 ng/mL)處理，探討MSTN對豬DFAT成脂分化的影響及其分子機制，尤其深入研究了MSTN和miR-130b之間的靶向調控關係，並在細胞和在體水平進一步探討了miR-130b對脂肪沉積的調控作用及機制。結果表明，與0 ng/mL MSTN處理組相比，25，50和100 ng/mL MSTN均能不同程度的抑制DFAT的成脂分化，TG沉積量顯著減少，且呈劑量依賴性，另外發現該作用是通過抑制脂肪細胞分化過程中關鍵的轉錄因子之一PPAR-γ的表達，並進而加速脂肪的分解和抑制脂肪的合成實現的。此外，與0 ng/mL MSTN處理組相比，25，50和100 ng/mL MSTN均能不同程度的促進DFAT細胞中miR-130b的表達。通過雙螢光素酶報告基因檢測並結合“種子序列”突變法，進一步闡明miR-130b與PPAR-γ之間有很強的靶向關係。通過“過表達”和“干擾”法進一步探討了miR-130b對豬IMF沉積的影響及其分子機制，並以高脂日糧誘導的肥胖小鼠為模型在在體水平上進行了深入驗證。結果表明，與miR-SC-DEX組細胞相比，miR-130b-DEX處理對細胞活力無顯著影響，但顯著降低了TG含量和PPAR-γ的表達，而miR-130b-Inhibitor-DEX細胞則呈現相反的結果。此外，與miR-SC-DEX細胞相比，miR-130b-DEX處理顯著降低了PPAR-γ下游因子Perilipin1及脂肪合成基因如FAS，ACC，11β-HSD1和FTO的表達，並顯著增加了HSL和ATGL的表達和酶活。在體結果表明，尾靜脈注射miR-130b-MV能通過抑制PPAR-γ的表達，抑制附睪脂肪沉積，扭轉高脂日糧所導致的小鼠肥胖。總之，本研究結果闡明了MSTN對豬IMF沉積的影響及其分子機制，並探討了MSTN和miR-130b在豬IMF沉積過程中的“對話”機制，揭示了MSTN/miR-130b/PPAR-γ信號通路在豬IMF沉積中的調控作用，從而為篩選調控豬IMF沉積的主要分子靶點，實現豬肉品質的調控提供理論支撐。
