《lncRNA316686對NGFR的調控機制研究》是依託上海交通大學，由吳哲褒擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：lncRNA316686對NGFR的調控機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳哲褒
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
垂體泌乳素腺瘤細胞表面D2R和NGFR數量的減少被認為是腫瘤耐藥的主要原因，NGF通過與其受體NGFR結合激活NF-κB來促使D2R表達，但對NGFR的調控機制未明。長鏈非編碼RNA（lncRNA）是最近發現的在多種生物學過程以及疾病中起重要調控作用的非編碼RNA。本課題前期採用lncRNA和mRNA晶片共表達譜分析篩選並用RT-PCR方法驗證泌乳素腺瘤藥物治療中NGFR相關的lncRNA316686。本課題將進一步在細胞水平驗證lncRNA316686對NGFR的調控及機制，同時體外和體內靶向干預觀察逆轉耐藥效果，以期在lncRNA水平調控NGFR表達，從而逆轉耐藥泌乳素腺瘤對藥物治療的反應性，同時lncRNA316686可以作為泌乳素腺瘤藥物治療敏感性的生物學分子指標從而指導臨床用藥。如果實驗成功，將為臨床解決耐藥泌乳素腺瘤的治療難題奠定實驗基礎。
結題摘要
長鏈非編碼RNA在腫瘤中的功能得到越來越多的重視和研究，但是在垂體瘤中的研究相對很少，在耐藥中的機制研究尚未見相關報導。本課題通過對3例藥物治療敏感的垂體泌乳素瘤標本和藥物治療耐藥的垂體泌乳素瘤標本進行晶片分析，找到差異性表達的長鏈非編碼RNA-H19，通過體內和體外實驗證明H19在垂體瘤的耐藥中扮演者重要作用。結果顯示：(1)干預及過表達GH3細胞的H19水平，聯合溴隱亭和卡麥角林治療後細胞存活率明顯下降。說明H19增加了GH3細胞對於藥物治療的敏感性。（2）經轉染H19的GH3細胞的裸鼠皮下移植瘤的H19表達水平升高，聯合卡麥角林的治療可明顯抑制皮下移植瘤生長。體內實驗再次證明H19增加了GH3細胞對於藥物治療的敏感性。（3）調節H19的表達水平後，通過WB和rtPCR技術發現H19在蛋白水平調節了Atg7的表達水平，並通過RNA免疫共沉澱實驗證明H19與Atg7蛋白存在結合。（4）通過對Atg7的蛋白降解途徑的研究發現，H19通過與Atg7結合調節了Atg7的泛素化降解途徑。
