《lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1軸向調控自噬減輕心肌缺血再灌注損傷》是依託南昌大學，由劉季春擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1軸向調控自噬減輕心肌缺血再灌注損傷
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉季春
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
自噬作為細胞自我保護機制，在心肌缺血再灌注損傷(IRI)中卻發揮“雙刃劍”效應。在總結前人與自身工作基礎上，我們假設lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1軸向調控自噬，減輕心肌IRI。在多參數確認自噬性心肌保護作用前提下，從細胞活力、心梗面積、左心功能等經典指標，在體內外水平闡明Notch1通過增強自噬，減輕心肌IRI；利用轉基因介導的回補實驗，探討miR-702-5p下調Notch1表達，削弱自噬性心肌保護作用；套用雙螢光素酶報告基因與biotin-avidin pulldown技術研究lncRNA-4321以miR-702-5p為節點調控Notch1表達的分子機理，再分層論述lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1軸向調控自噬，減輕心肌IRI的生物效應，旨在揭示lncRNA/miRNA防治心肌IRI的分子機制，為臨床心肌保護策略提供新的理論依據。
結題摘要
我們依據 “lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1軸向調控自噬，減輕心肌IRI”假設，在確認Notch1信號通路調控自噬性心肌保護作用基礎上，構建miR-702-5p、lncRNA-4321腺病毒表達與干擾載體，感染H9c2mRFP-GFP-LC3穩轉細胞株，建立缺血再灌注模型，Western blot檢測N1ICD、p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表達，確認lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1在自噬中的調節作用，再檢測心肌細胞存活率及心肌自噬改變，觀察明確lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1軸向調控自噬的心肌保護效應，採用雙螢光素酶報告基因技術探討lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1之間的調控機制，我們實驗數據表明增強lncRNA-4321表達，可以抑制miR-702-5p 活性，使Notch1表達上調，通過增強心肌自噬，提高心肌細胞存活率，從而減輕心肌缺血再灌注損傷。該課題已闡明lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1軸向調控自噬，減輕心肌IRI相關分子機制，並可作為新的靶點，為研製新型心肌保護藥物奠定的理論與實驗基礎。
