《lncRNA H19調控DP細胞毛囊誘導功能的機制研究》是依託汕頭大學，由祝寧俠擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：lncRNA H19調控DP細胞毛囊誘導功能的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：祝寧俠
- 依託單位：汕頭大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
研究已證實低代毛乳頭（DP）細胞可以誘導毛囊再生，高代則無此能力。我們知道，Wnt信號通路在DP細胞誘導毛囊再生中起關鍵作用。我們前期研究發現：低代DP細胞中和Wnt通路最密切相關的lncRNA H19表達水平明顯升高，而WIF1表達水平則顯著下調。最近研究顯示，lncRNAs通過對WIF1的表觀遺傳學修飾調控Wnt信號通路。本課題組擬在此基礎上，在細胞模型中採用RNA干擾/過表達、RT-PCR、RIP、ChIP等實驗技術，明確lncRNA H19通過WIF1調控Wnt信號通路的分子機制，並進一步通過體內外毛囊誘導模型觀察lncRNA H19對DP細胞毛囊誘導功能的影響，從而證實“lncRNA H19通過WIF1調控Wnt信號通路維持DP細胞誘導功能”的假說，其結果將為利用低/高代數DP細胞差異RNA的分析，開發恢復DP細胞誘導功能藥物，治療脫髮性疾病提供新的思路。
結題摘要
研究表明位於毛囊底部的低代毛乳頭（DP）細胞可以誘導毛囊再生，高代則無此能力。因此，研究低/高代DP細胞毛囊誘導能力的差異分子機制，可以為開發恢復DP細胞誘導功能藥物，治療脫髮性疾病提供重要思路。目前，長鏈非編碼RNAs在眾多生理和病理過程中發揮重要作用。本研究通過基因晶片在表現為毛囊誘導能力差異的低/高代DP細胞進行lncRNAs和mRNAs的差異表達分析，結合生物信息學技術，篩選出差異表達明顯、與Wnt信號通路密切相關的lncRNA H19作為研究靶點，結合過表達、分子生物學、形態學、蛋白印跡、免疫螢光等技術，證實：1.不同年齡來源的頭皮標本DP細胞均存在低/高代毛囊誘導功能差異，年齡越大，失去毛囊誘導功能的DP細胞代數越低。2.與高代數DP細胞相比，低代數DP細胞中lncRNAH19表達明顯升高。3.過表達lncRNAH19後，發現細胞質中β-catenin無改變，而細胞核中β-catenin明顯增加，Wnt通路轉錄活性明顯增強。4.過表達lncRNAH19後，發現miR-29a顯著升高，而其靶基因DKK1、SFRP2、KREMEN2等Wnt通路的抑制因子明顯下調。4.RNA pull down質譜鑑定結果顯示在人DP細胞中，有97個蛋白與H19有特異性結合，其正調控miR-29a的機制與甲基化啟動子相關。5.穩定過表達H19，培養傳代至6代，仍可表現多層聚集性生長，裸鼠背部皮膚注射穩定過表達H19的DP4細胞可以誘導裸鼠背部毛髮長出。6.穩定過表達H19傳代後的DP4細胞注射，上調miR-29a的表達，靶基因DKK1、SFRP2、KREMEN2蛋白有不同程度的下調。7.新生毛囊Wnt信號通路關鍵因子β-catenin、Wnt3a、LRP6、LEF-1表達明顯增加，TCF3表達輕度上調。我們的研究明確了lncRNAH19調控DP細胞Wnt信號通路的活化從而調節其毛囊誘導功能的機制。其結果為開發恢復DP細胞誘導功能的藥物，促進毛囊再生，治療臨床脫髮性疾病提供新的思路和重要的實驗依據。
