《X染色體連鎖基因與自身免疫性疾病性別差異的研究》是依託吉林大學，由孟兆麗擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：X染色體連鎖基因與自身免疫性疾病性別差異的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孟兆麗
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
很多自身免疫性疾病存在性別差異，而性染色體是性別在遺傳上的根本區別。由於炎症反應是自身免疫性疾病最重要的病理表現，因此我們推測X染色體上可能存在具有炎症反應調節功能的基因。我們前期研究發現，在肝壞死炎症模型中，某些X染色體連鎖基因突變小鼠（HO）的生存曲線、細胞因子釋放水平較野生型小鼠（WT）有顯著差異。本研究擬以這些突變品係為研究對象，根據PB轉座子插入突變位點確定候選基因,採用qPCR，western-blot等分子生物學方法，分析候選基因的轉錄、表達在HO與WT中是否有區別，考察基因表達水平對免疫系統的影響，最終明確候選基因與炎症反應的關係，從而驗證該基因是否具有炎症調節功能。本研究有望發現炎症反應調節功能的X染色體連鎖基因，將為揭示人體自身免疫性疾病的性別差異提供遺傳物質基礎和理論依據。新基因的發現將為人體自身免疫性疾病、敗血病及腫瘤等炎性疾病的發病機理、診斷和新藥研發提供新思路。
結題摘要
自身免疫性疾病患者具有性別差異，如系統性紅斑狼瘡女性患者顯著多於男性。由於炎症反應是自身免疫性疾病最重要的病理表現，因此我們推測X染色體上可能存在具有炎症反應調節的相關基因，這是本項目實施的重要背景。本項目主要研究內容有以下幾點：首先，我們構建了84株X染色體連鎖基因突變小鼠的炎症模型，以X染色體突變雄性小鼠（HO小鼠）及其同窩野生型小鼠（WT小鼠）為研究對象，採用腹腔注射對乙醯氨基酚方法構建肝損傷驗證模型，且小鼠ALT和AST水平顯著高於對照組，模型構建成功。其次，通過比較HO小鼠與WT小鼠在炎症模型中的生存曲線，血清細胞因子（IL-1α， IL-6， MCP-1, TNFα），並從84個突變株中篩選獲得具有顯著差異的9株候選小鼠作為研究對象，他們的轉座子插入突變位點分別為X染色體基因組的66.354988, 93.340651, 161.484928, 16.203244, 35.253645, 64.960178, 53.78216, 82.269388, 135.066724 Mb。其中93.340651Mb位點位於膜突蛋白(Moesin)基因組序列，且在炎症模型中，Msn基因突變小鼠與WT小鼠的生存曲線具有顯著差異。此外，Msn基因突變小鼠與WT小鼠血清釋放的細胞因子IL-1α和MCP-1也具有顯著差異，因此Msn基因突變小鼠被選為主要候選研究對象。再次，通過多種方法明確了Msn基因突變小鼠的分子背景。通過與NCBI資料庫比對，明確了轉座子的具體插入位點位於Msn基因外顯子2和外顯子3之間的內含子。Western blot和免疫螢光實驗結果表明，轉座子顯著降低了MSN蛋白在小鼠心，肝，脾，肺和腎組織中的表達水平。最後，採用流式細胞術檢測了Msn突變小鼠和WT小鼠外周血中各免疫細胞的變化。結果表明，與WT小鼠比較，MSN缺失顯著降低了外周血CD4+，CD8+T細胞的比例，並增加了CD4+, CD8+ T細胞中CD62L分子的表達。此外，MSN缺失也顯著增加了外周血中B1細胞和Naïve B細胞的比例。通過以上研究，我們明確了X染色體連鎖基因Msn具有顯著的調控炎症反應功能，為從基因水平研究自身免疫性疾病性別差異提供了進一步的研究基礎。
