《Wnt10b激活表皮幹細胞誘導毛囊基板的形成》是依託汕頭大學，由李宇擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Wnt10b激活表皮幹細胞誘導毛囊基板的形成
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李宇
- 依託單位：汕頭大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
毛囊的發生髮育依賴於一系列信號因子的相互作用，Wnt家族是該過程所必需的和最早出現的信號之一。研究表明，Wnt10b是Wnt家族中能夠誘導皮膚細胞向毛囊方向分化的獨特成員；我們的前期研究亦提示，胚胎期表皮Wnt10b的表達早於毛囊基板的形成，且基板形成時表皮基底層Wnt10b水平顯著積聚上調。鑒於表皮基底層是表皮幹細胞的儲存庫之一，且基板形成是毛囊發育啟動的標誌，我們提出Wnt10b激活表皮幹細胞誘導毛囊再生的啟動，並擬利用螢光免疫組化、基因工程、RNA干擾、APA微囊成囊技術、組織培養、模型構建等方法探討Wnt10b誘導表皮毛囊基板的形成及其可能機制，並研究：（1）Wnt10b對毛囊發生髮育的早期重要作用；（2）Wnt10b誘導表皮基底層類基板形成及此時表皮幹細胞的激活和走向；（3）Wnt10b體外調控表皮幹細胞的活化分化；（4）Wnt10b誘導的類基板能否發育為完整毛囊。
結題摘要
本項目按計畫完成了： 1.觀察SD大鼠胚胎背部皮膚毛囊的形態發生和Wnt/β-catenin信號在毛囊發育過程中的表達。SD大鼠背部皮膚最早期的毛囊發育啟動於胎齡15.5-16d,基本結束於出生後第3d;Wnt10b 與β -catenin 參與啟動毛囊的形態發生和毛囊的進一步發育。 2.構建適合研究毛囊發育啟動的胎鼠皮膚體外器官培養模型,觀察nt10b 與β -catenin 信號在該模型毛囊發育過程中的時空表達。在體外短期培養的胎鼠背部皮膚毛囊發育及Wnt/β-catenin信號的表達與體內基木一致,可以作為研究毛囊發育啟動的模型，Wnt/β-catenin信號的表達與毛囊的發育密切相關。 3.利用基因工程技術獲得人Wnt10b基因真核表達載體,將其轉染COS-7細胞並檢測其在COS-7細胞中的表達。COS-7細胞能夠表達重組Wntl0b蛋白,這為研究Wni10b在毛囊發育過程中的作用及其機制提供一個有利的研究工具。 4.觀察基因工程重組的人Wnt10b蛋白能否促進大鼠胚胎皮膚毛囊的發育和探討其潛在機制。當胎鼠背部皮膚在體外培養時,Wnt10b蛋白促進皮膚的毛囊發育,而且,Wnt10b蛋白很可能通過經典的Wnt信號通路調控細胞β-catenin水平來發揮作用的。 5.利用RNA干擾技術抑制體外培養的胎鼠皮膚Wnt10b蛋白的表達,觀察沉默Wnt1Ob基因的表達能否抑制毛囊的發育和探討其潛在機制。在體外器官培養的環境中,siRNA能夠抑制胎鼠背部皮膚組織Wnt10b蛋白的表達,從而抑制毛囊發育的啟動,減少新形成毛囊的數量;siRNA與胎鼠皮膚的體外器官培養結合,可以模擬轉基因鼠的基因敲除;Wnt10b與β-catenin的mRNA表達沒有直接關係,但可能在蛋白水平上調控細胞β-catenin的表達。
