基本介紹
- 中文名：Wazard大量DNA純化系統
- 所屬公司：Promega公司
- 套用領域：生物化學
- 主要作用：DNA純化系統既簡單又快速
概述,步驟,注意事項,
概述
步驟
該系統中含有的試劑和柱子可以用於10次100-500ml質粒培養液的分離和純化，試劑包括： 150ml 細胞懸浮液，150ml 細胞裂解液，150ml 中和液，100ml Wizard 大量DNA純化樹脂，125ml Wizard柱子洗脫溶液和10支 Wizard帶有存儲離心管的柱子。
1、100-500ml細胞培養液置離心管中，22-25℃下5000g離心10分鐘，所得細胞沉澱充分懸浮於細胞懸浮液中。
2、 加15ml細胞裂解溶液並輕輕混合，可以反覆倒置混合，但不能用渦旋振盪，細胞裂解完全時，溶液會變清，這一步需要20分鐘。
3、 加15ml中和溶液，立即反覆倒置離心管數次，並使之混勻。
4、 14000g,22-25℃離心15分鐘。
5、 小心地將上清液吸出並移至一個新離心管中。
6、 加0.5倍體積的異丙醇，混合均勻，14000g 22-25℃下離心15分鐘。
7、 棄上清，懸浮DNA沉澱於2ml TE緩衝液中。這一步中也許有的沉澱不能溶解。
8、 加10ml Wizard大量DNA純化樹脂溶液，並渦旋混合。
9、每一個樣品，使用一支Wizard大量柱子，柱子的頭插在真空器上（Promega產品，與此配套）。
10、將樹脂/DNA混合液轉入柱子中，真空抽取樹脂/DNA混合液。
11、將樹脂/DNA混合液抽乾後，加13ml柱子洗脫溶液至離心管中，對管底部的樹脂/DNA進行洗脫（柱子一邊旋轉一邊加入洗脫液），並加入柱子中。
12、真空抽乾所加入的洗脫。
13、 再加12ml柱子洗脫液進柱子並抽乾。
14、 加入5ml 80%乙醇漂洗柱中的樹脂，柱子真空抽乾後將柱子放入用戶提供的離心管中，2500rpm（1300g）離心5分鐘。
15、 取出柱子，真空抽乾5分鐘，再將柱子放入系統中所提供的離心管中，2500rpm（1300g）離心5分鐘。
16、在柱子中加入1.5ml 65-70℃預熱過的滅菌重蒸水或TE,1分鐘後2500rpm（1300g）離心柱子/離心管5分鐘。
17、 取出柱子，離心管中溶液即為提取的質粒DNA，可以直接放在離心管中，蓋上蓋子，儲存在4℃或-20℃備用。
注意事項
⒈ 在使用之前，系統所提供的柱子洗脫液按1:1加入125ml 95%乙醇。
⒉ 純化樹脂必須混勻後再用.
