《UXT與β-catenin互作促進I型干擾素表達的分子機制研究》是依託武漢大學，由陳述亮擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：UXT與β-catenin互作促進I型干擾素表達的分子機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陳述亮
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
細菌和病毒感染導致宿主發生炎症和免疫反應是機體抵抗外界病原菌入侵的一種防禦策略。細胞抗病毒天然免疫一直是研究的熱點問題，其精確的調控機制還有待研究。泛表達蛋白UXT有兩個轉錄本，UXT作為一個分子伴侶是很多多蛋白複合物的組成部分，這表明其功能非常廣泛。我們在前期酵母雙雜交篩選工作以及後續驗證實驗中，發現UXT的兩個轉錄本編碼的蛋白都可以與Dvl2和下游的β-catenin互作，UXT促進β-catenin招募轉錄因子IRF3。已報導Dvl2參與調控NFκB的活性，β-catenin能夠被IRF3招募到IFNB1啟動子處與CBP和P300一起形成轉錄增強體促進I型干擾素的表達。根據以上的研究和我們的初步實驗結果，可以推測UXT能夠與Dvl2和β-catenin互作調控細胞抗病毒先天免疫。接下來，我們將採用多種手段，根據前期的實驗結果來驗證我們的假設。
結題摘要
該項目“UXT與β-catenin互作促進I型干擾素表達的分子機制研究”主要擬闡明UXT在β-catenin介導的抗病毒天然免疫中的精確調控機制。UXT作為一個分子伴侶是很多多蛋白複合物的組成部分，這表明其功能非常廣泛。我們在前期酵母雙雜交篩選工作以及後續驗證實驗中，發現UXT的兩個轉錄本編碼的蛋白都可以與Dvl2下游的β-catenin互作，而Dvl2參與調控NFκB活性, β-catenin能夠被IRF3招募到IFNB1啟動子處與CBP和P300一起形成轉錄增強體促進I型干擾素的表達。病毒感染可以激活轉錄因子NFκB和IRF3的活性， 促進干擾素的表達。根據以上的發表結果和我們的初步實驗結果，推測UXT能夠與β-catenin互作調控細胞抗病毒先天免疫。因此，該項目的主要研究內容為用實驗結果來驗證我們的假設。我們證明了UXT可以與β-catenin的C端互作， 並且互作發生在細胞質中。對於UXT參與β-catenin介導的抗病毒方面，是基於β-catenin和IRF3的互作基礎之上，我們多次實驗發現在人的HEK293T細胞中很難重複該互作，因此UXT在抗病毒方面的研究還在探索之中。但是β-catenin的最大的作用是調控發育過程中的WNT通路，我們隨後轉變方向，探討了UXT在β-catenin介導的經典WNT通路中的作用，具體結果有，過表達UXT呈現劑量依賴型的提高WNT報告系統LEF-Luc的活性，也增加了另外一個報告系統5xTOP-luc的活性；降低 UXT的的表達，抑制LEF-Luc和5xTOP-luc的活性；通過螢光定量PCR技術檢測到過表達UXT顯著增加了下游的Axin2，cyclin D1和c-myc的mRNA表達，干涉UXT的表達後下游的Axin2，cyclin D1和c-myc的mRNA表達水平明顯降低，以上證據說明UXT可以調節WNT通路。我們的實驗發現UXT可以在WNT通路激活的情況下抑制β-catenin和Dvl2的互作。在UXT 缺失細胞系中GSK-3β和非磷酸化以及磷酸化的β-catenin互作增強，導致β-catenin的磷酸化降解，WNT通路受到抑制。在KO細胞系中用wnt3a激活WNT通路，發現與WT相比，下游的Axin2,cyclin D1和c-myc的mRNA表達水平明顯降低，蛋白水平也明顯降低。該研究證實了UXT通過與β-c
