《USP6對腫瘤細胞內吞作用的影響及機制研究》是依託東南大學，由沈傳陸擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：USP6對腫瘤細胞內吞作用的影響及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：沈傳陸
- 依託單位：東南大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤細胞無限生長、惡性轉化和轉移一直是令人十分關心卻又倍感困惑的問題。近年來人們發現，其原因可能與腫瘤細胞內吞作用機制異常有關。癌基因USP6可發生多種染色體易位而高表達，促進人類腫瘤形成，提示USP6功能非常重要。已有結果表明，USP6特異性結合Arf6，使Arf6向腫瘤細胞質膜轉位、活化，從而調節格線蛋白非依賴性內吞作用，但USP6促使Arf6轉位、活化的機制尚不清楚。我們在國家自然科學基金（30570696，已結題）資助下，經研究表明USP6能與肌球蛋白調節性輕鏈相互作用，增強其磷酸化，提示USP6可能與肌球蛋白功能調節有關。肌球蛋白作為分子馬達廣泛參與細胞內吞作用及物質運輸，因此，本項目旨在有關USP6的前期研究基礎上，進一步闡明USP6對肌球蛋白功能和細胞內吞作用的影響及機制。該項目的完成不僅可以闡明USP6功能，而且對肌球蛋白功能和腫瘤細胞內吞作用的調節機制研究都具有重要意義。
結題摘要
腫瘤細胞無限生長、惡性轉化和轉移一直是令人十分關心卻又倍感困惑的問題。近年來人們發現，其原因可能與腫瘤細胞內吞作用機制異常有關。癌基因USP6可發生多種染色體易位而高表達，促進人類腫瘤形成，提示USP6功能非常重要。已有結果表明，USP6特異性結合Arf6，使Arf6向腫瘤細胞質膜轉位、活化，從而調節格線蛋白非依賴性內吞作用，但USP6促使Arf6轉位、活化的機制尚不清楚。在本研究中，我們用PCR等技術構建了MRLC和USP6及其一系列變異體的原核表達質粒。以純化的GST蛋白為對照，將體外表達純化的MRLC蛋白與上述GST-USP6及其突變體融合蛋白進行GST Pulldown實驗後，進行Western Blot分析，結果提示USP6與MRLC相互作用的部位可能在USP6蛋白氨基端1～174胺基酸之間；體外表達純化的GST-MRLC蛋白與轉染表達的USP6及其變異體進行GST Pull-down實驗後，進行Western Blot分析，結果進一步表明USP6與MRLC相互作用的部位可能在USP6蛋白氨基端1～174胺基酸之間。以未轉染和HA-pcDNA3.0空載體為對照，USP6及其變異體HA-USP6(447,delta117~174)均能下調MRLC磷酸化水平，而USP6變異體HA-USP6(447,delta59~116)和HA-USP6(447,delta59~116，V173S)則無明顯作用，提示USP6可能與肌球蛋白功能調節有關。與USP6同源體PRC17作用類似，USP6高表達能抑制人MCF-7乳腺癌細胞EGFR內吞降解，以增強EGFR的穩定性和作用；而MRLC表達的下調可能在EGFR內吞降解中可能具有作用。
