《USAG-1對Alport綜合徵足細胞的損傷作用及分子機制研究》是依託北京大學，由張琰琴擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：USAG-1對Alport綜合徵足細胞的損傷作用及分子機制研究
- 項目負責人：張琰琴
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Alport綜合徵是一種遺傳性進行性腎炎，男性X連鎖顯性遺傳的患者40歲前發生終末期腎臟病的比例高達90%。足細胞損傷、蛋白尿進行性加重與Alport綜合徵疾病進展密切相關。研究發現敲除USAG-1的Alport綜合徵小鼠蛋白尿減輕、腎小球硬化比例減少，但USAG-1是否通過足細胞發揮作用及可能的機制遠未澄清。本研究套用USAG-1抗體干預Alport綜合徵小鼠，檢測疾病不同階段USAG-1的表達與足細胞損傷的關係，證明USAG-1在Alport綜合徵中對足細胞的損傷作用；體外培養足細胞，通過過表達USAG-1、用USAG-1重組蛋白處理足細胞，檢測Wnt信號通路關鍵分子，套用Wnt信號通路特異性抑制劑，進一步檢測足細胞損傷指標，揭示USAG-1導致足細胞損傷的分子機制。本課題將從新的角度加深對Alport綜合徵疾病進展機制的理解，為尋求新的治療靶點提供重要理論依據。
結題摘要
Alport 綜合徵是一種預後嚴重不良的遺傳性慢性腎臟疾病，臨床進展過程表現為單純血尿，微量白蛋白尿，大量蛋白尿，直至腎衰竭。然而目前防止腎衰竭的藥物治療遠遠不夠。所以尋求新的靶點或通路來阻止甚至逆轉Alport 綜合徵疾病進展是急需要解決的臨床和科研問題。足細胞的損傷和功能紊亂是Alport綜合徵疾病進展的背後驅動力，然而在Alport綜合徵中導致足細胞損傷的因素和分子機制遠未澄清。USAG-1在Alport綜合徵疾病進展過程中具有關鍵作用，很可能成為新的阻止疾病進展的靶向。足細胞是否是USAG-1在腎小球發揮作用的靶細胞呢？目前尚無研究報導USAG-1是否對足細胞有作用及可能的分子機制。 我們通過Alport綜合徵小鼠模型（Col4a3-/-小鼠），套用免疫蛋白印跡方法（Western blot）檢測疾病不同階段（初期、中期、晚期）小鼠腎組織USAG-1的表達，發現隨著疾病進展小鼠腎組織USAG-1的表達增加，Wnt1和Activeβ-catenin信號分子表達增加。同時檢測了嘌呤黴素大鼠腎病模型（足細胞損傷的動物模型），發現在蛋白尿最重的第十天（也是足細胞損傷最重的階段）USAG-1的表達增加，Wnt1和Activeβ-catenin信號分子表達增加。為進一步探討USAG-1對足細胞的損傷作用和機制，我們通過體外培養小鼠足細胞（MPC5），過表達USAG-1，套用MTT法檢測足細胞損傷情況，發現過表達USAG-1導致足細胞活性顯著降低，足細胞特異性標誌物nephrin表達降低。通過足細胞過表達USAG-1，並套用Wnt/β-catenin通路特異性抑制劑Dkk1不同濃度干預，發現足細胞活性在套用Dkk1後呈劑量依賴性上調。以上實驗結果提示USAG-1通過調節Wnt信號通路引起足細胞損傷，參與Alport綜合徵疾病的進展。目前國內外並沒有USAG-1導致足細胞損傷及機制的研究報導，本研究創新性以USAG-1對Alport綜合徵疾病進展中足細胞的損傷作用為切入點，揭示和證實USAG-1通過Wnt信號通路導致足細胞損傷，為進一步理解Alport綜合徵疾病進展的分子機制和探索Alport綜合徵新的治療靶點提供了理論數據。
