Toll樣受體在移植靜脈內膜增生機制中作用的研究

《Toll樣受體在移植靜脈內膜增生機制中作用的研究》是依託吉林大學，由柳克祥擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Toll樣受體在移植靜脈內膜增生機制中作用的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：柳克祥
• 依託單位：吉林大學

項目摘要

冠狀動脈旁路移植術（CABG）是治療冠心病最有效的方法之一，大隱靜脈是冠脈旁路移植手術中最常用的血管橋，然而靜脈血管移植物術後血管內膜增生導致再狹窄的原因及作用機制尚未完全闡明，並且針對這種再狹窄尚無理想的治療措施,因此對其發生機制和治療方案的研究十分必要。有研究研究顯示Toll樣受體（TLR）參與了動脈粥樣硬化過程和血管損傷過程中的內膜增生，但具體作用和功能尚未可知。本研究通過大鼠冠狀動脈旁路移植模型明確介導CABG術後靜脈移植物內膜增生的TLR家族成員，以及TLRs的基因表達和靜脈移植物內膜增生的相互關係；通過siRNA沉默TLR4基因抑制或減輕靜脈移植物的內膜增生；同時探索靜脈移植物內膜增生機制、VSMC增殖與遷移的機制，EnMT過程與內膜增生之間的關係。以期加深對冠脈旁路移植術後靜脈移植物內膜增生機制的了解，並可能提供一種新穎、有效、可行的方法來預防冠脈旁路移植術後移植物再狹窄。

結題摘要

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是導致人類死亡的主要原因。冠狀動脈旁路移植術（CABG）是治療嚴重冠心病最有效的方法之一。研究顯示，靜脈血管移植物的再狹窄是由於血管平滑肌細胞的增殖和遷移以及細胞外基質（ECM）沉積導致的血管內膜增生的結果。 最近發現TLRs在動脈粥樣硬化過程中具有潛在作用。研究TLR4在移植靜脈及血管平滑肌細胞（VSMCs）病理生理功能之間的關係，可能為揭示頸靜脈移植血管內膜增生的作用機制提供重要的實驗基礎及理論依據，為血管內膜增生的診治及預後評估提供新的靶點。 本研究利用RNA干擾技術研究TLR4在大鼠旁路移植術後移植靜脈內膜增生中的作用，並用逆轉錄病毒轉染技術研究TLR4配體Prx1對VSMCs細胞增殖、侵襲及遷移能力的影響。一、建立大鼠頸靜脈移植模型，將其分為五組：林格氏液組、對照siRNA組、TLR4 siRNA溶液組、TLR4 siRNA蛋白膠組、TLR4 siRNA溶液+蛋白膠組，其中TLR4 siRNA蛋白膠組是套用生物蛋白膠將質粒、脂質體及蛋白生物膠混合體均勻的噴灑於血管外膜周圍，以達到持續釋放藥效的效果。對照組血管內膜在術後明顯增生，而TLR4干擾組內膜增生不明顯，且TLR4 siRNA溶液組比蛋白膠組干擾效果好，但沒有蛋白膠干擾效果持續時間長，而TLR4 siRNA溶液+蛋白膠組在干擾效果及持續時間上均達到最佳。同時，TLR4干擾組顯著抑制了炎性細胞因子及粘附分子的表達，證實TLR4在移植血管內膜增生中的作用及機制。二、檢測到TLR4的配體Prx1在移植靜脈中高表達，因此構建逆轉錄病毒介導的Prx1穩定過表達的VSMC細胞系，檢測Prx1過表達對VSMC細胞增殖、侵襲及遷移能力的影響。檢測結果顯示，Prx1的過表達促進了VSMC細胞的增殖、侵襲及遷移能力。為了證實Prx1對TLR4的依賴性，構建TLR4干擾質粒及Prx1過表達質粒共轉染的細胞組，檢測VSMC細胞系的增殖及遷移能力。結果顯示，TLR4干擾組能夠有效的降低VSMC細胞的增殖及遷移能力。這不僅驗證了Prx1在血管平滑肌細胞增殖、侵襲及遷移過程中的作用，更證實了TLR4受體與配體Prx1的相互作用，為下一步預測並驗證TLR4/Prx1激活的信號通路奠定了基礎。 綜上所述，TLR4/Prx1有望成為血管內膜增生診斷、治療與預後評估的新靶點。