TWEAK/Fn14信號激活在抗dsDNA抗體致病機制中的關鍵作用

《TWEAK/Fn14信號激活在抗dsDNA抗體致病機制中的關鍵作用》是依託西安交通大學，由夏育民擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：TWEAK/Fn14信號激活在抗dsDNA抗體致病機制中的關鍵作用
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：夏育民
• 依託單位：西安交通大學

中文摘要

抗dsDNA抗體是SLE患者血清中標誌性自身抗體之一，可直接導致腎臟損害，但其如何穿透濾過膜、沉積於基底膜的機制不明。我們前期研究證實，一種新型信號通路TWEAK/Fn14的異常激活可導致炎症性局灶組織損害；且意外發現，Fn14基因敲除未改變MRL/lpr狼瘡小鼠血清中抗dsDNA抗體等滴度，卻明顯降低腎臟基底膜IgG沉積與尿蛋白水平，強烈提示TWEAK/Fn14信號激活可破壞腎小球濾過膜結構。為證實假說，我們擬構建體外腎小球濾過膜模型，研究TWEAK/Fn14信號激活對內皮細胞、足細胞生存周期的影響及如何調控濾過膜連線蛋白表達的分子機制；篩選高致病性抗dsDNA抗體亞型並建立腎損害小鼠模型，運用TWEAK或Fn14中和性抗體、體內轉染Fn14 siRNA等技術阻抑TWEAK/Fn14信號激活，觀察對狼瘡特異性腎損害的治療效應。本研究將為高效、選擇性阻斷SLE重要靶器官損害建立新途徑。

結題摘要

抗dsDNA抗體是SLE患者血清中標誌性自身抗體之一，可直接導致腎臟損害，但其如何穿透濾過膜、沉積於基底膜的機制不明。我們前期發現，一種新型信號通路TWEAK/Fn14的異常激活可導致炎症性局灶組織損害；而且Fn14基因敲除未改變MRL/lpr狼瘡小鼠血清中抗dsDNA抗體等滴度，卻明顯降低腎臟基底膜IgG沉積與尿蛋白水平，這提示TWEAK/Fn14信號激活可破壞腎小球濾過膜結構。在本課題，我們利用細胞因子刺激和質粒載體技術，構建了5種CDR區相同的抗dsDNA抗體雜交瘤克隆（IgG1、IgG2b、IgG2a、IgG3、IgM）。採用表面等離子共振技術等技術，定量檢測了各亞型抗dsDNA抗體與腎組織相關抗原分子的特異性結合力，發現IgG3亞型結合能力較強。通過體外培養腎小球血管內皮細胞（GENC）、腎小球足細胞（GVEC），構建體外腎小球濾過膜模型，然後施加TWEAK刺激，發現TWEAK/Fn14信號激活誘導腎臟固有細胞凋亡或壞死的新機制。我們觀察到TWEAK/Fn14信號激活誘導GENC與GVEC出現同時出現凋亡及壞死，Fn14 siRNA轉染後細胞死亡率明顯降低。在不同TWEAK/Fn14信號水平下，NF-κB下游信號相關蛋白Caspase-8（介導細胞凋亡）、cathepsin B（介導細胞壞死）表達變化，導致這些細胞凋亡、壞死及nephrin、podocin等連線蛋白表達降低。我們還利用CRISPR/Cas9技術，獲得了Fn14基因敲除SCID小鼠模型。對該模型靜脈注射抗dsDNA抗體，證實不同亞型抗dsDNA抗體存在體內差異化致病作用，Fn14信號抑制可以有效緩解這些致病性抗體在動物模型的效應，包括腎小球區域抗dsDNA抗體沉積減少，小鼠尿蛋白等指標改善。這些結果不僅闡明了抗dsDNA抗體誘導紅斑狼瘡腎損害的機制，也為今後探索阻斷其致病效應的新療法奠定了基礎。