《TRPV4在頜下腺水分泌中的作用及機制研究》是依託北京大學，由張艷擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TRPV4在頜下腺水分泌中的作用及機制研究
- 項目負責人：張艷
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
乙醯膽鹼激活M受體和去甲腎上腺素激活腎上腺素受體是調控頜下腺分泌的經典途徑。申請者在前期工作中首次發現頜下腺廣泛分布有TRPV4受體，提示可能存在TRPV4調控頜下腺分泌的新途徑，但TRPV4激活後的作用機制還需進一步研究。本課題擬採用生理學、藥理學和分子生物學等方法，以大鼠和小鼠頜下腺為對象，以細胞內鈣離子，微管蛋白及水通道蛋白5為靶點，探討激活TRPV4增加頜下腺細胞內鈣離子的途徑；探討激活TRPV4對微管蛋白聚敷胺化的影響；探討激活TRPV4對水通道蛋白5功能的影響，以及相應的信號轉導通路，從而明確激活TRPV4促進頜下腺細胞水和電解質分泌的分子機制，豐富和完善TRPV4調節頜下腺分泌的理論。該研究不僅為全面認識調控頜下腺分泌的機制提供新見解，而且為人工干預頜下腺的分泌提供新靶點。
結題摘要
背景：靜息唾液主要由下頜下腺分泌，腺泡細胞內持續的Ca2+增加是保證分泌的重要信號，通過調控細胞內的Ca2+信號可以對腺體的分泌進行人工調控。目前的研究關於腺泡細胞膜上介導Ca2+進入的通道尚不清楚。實驗室前期研究發現配體門控非選擇陽離子通道TRPV4（transient receptor potential vanilloid subtype 4）家族成員在下頜下腺表達，但其在下頜下腺的生理功能尚不清楚。本研究旨在探討TRPV4在下頜下腺分泌調控中的作用及其對M3R介導的唾液分泌的影響。方法：選取8～12周C57BL/6小鼠，離體小鼠下頜下腺灌流研究TRPV4激活後對分泌的影響，以及TRPV4抑制後對卡巴膽鹼所誘導分泌的影響；Fura-2AM法測定TRPV4激活及抑制後細胞內鈣信號變化；在體唾液收集觀察TRPV4激活及抑制後對匹羅卡品誘導腺體分泌的影響。SMG-C6細胞轉染trpv4的質粒，免疫共沉澱檢測MAChR激動劑卡巴膽鹼（carbachol，CCh）對TRPV4磷酸化的影響；SMG-C6細胞轉染aqp5質粒，免疫螢光研究TRPV4激活及抑制後水通道蛋白5（aquaporin 5, AQP5）在細胞內的位置變化。結果：離體灌流結果顯示，TRPV4抑制劑RN1734和HC067047會抑制卡巴膽鹼所誘導的腺體分泌。在腺泡細胞上，TRPV4抑制劑也可以明顯地抑制卡巴膽鹼所誘導的細胞內鈣離子[Ca2+]i升高。TRPV4抑制劑均可以抑制匹羅卡品誘導的腺體分泌及AQP5從細胞漿向細胞膜的轉位。結論：TRPV4在M3R介導的唾液分泌中不可或缺，其發揮作用的方式是通過介導細胞外鈣離子進入細胞內，影響細胞內的鈣信號及下游AQP5細胞內定位。
