《TRPC1和TRPC4在蛛網膜下腔出血後腦血管痙攣中的作用機制研究》是依託蘇州大學，由王中擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TRPC1和TRPC4在蛛網膜下腔出血後腦血管痙攣中的作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王中
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腦血管痙攣（CVS）是動脈瘤性蛛網膜下腔出血（SAH）的嚴重併發症，致死致殘率高，目前在臨床上缺乏有效的治療手段。既往研究發現鈣離子內流導致的血管平滑肌收縮是SAH後CVS的重要原因。瞬時受體電位通道C（TRPC）是一種位於細胞膜上的離子通道蛋白，其中TRPC1和TRPC4是調控鈣離子內流的主要亞型，因此本研究以這兩種蛋白質功能作為切入點，從細胞、組織和活體三個層面構建SAH模型，套用RNAi、基因轉染、給予藥物，以及基因敲除等干預手段，結合膜片鉗、血管張力評估、分子生物學技術與形態學觀察，測定SAH環境下TRPC1和TRPC4的表達，觀察血管平滑肌細胞、內皮細胞以及血管變化，檢測鈣離子電位水平和濃度，從而闡明TRPC1和TRPC4在CVS發生過程中的作用，預期研究結果將揭示血管平滑肌和內皮細胞鈣離子穩態失衡的新機制和CVS相關異常信號通路的新途徑，為SAH後CVS的臨床治療提供新的策略。
結題摘要
已有研究表明瞬時電位受體鈣離子通道1和4（TRPC1&4）參與到大鼠蛛網膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage ,SAH）後血管痙攣的發生髮展中，但TRPC1&4在SAH後早期腦損傷（early brain injury, EBI）中的作用尚未見報導。本課題擬利用體內外SAH模型研究TRPC1&4的表達及其對神經元的影響。我們發現，SAH後EBI過程中，TRPC的蛋白水平於72小時表達最高。SAH後神經元的凋亡率和壞死率均顯著上升，TRPC1&4下調進一步加劇神經元的凋亡和壞死；反之，TRPC1&4上調可以顯著緩解神經元的凋亡和壞死。說明在SAH後EBI過程中，TRPC1&4可能作為一種內源的神經保護因子發揮作用。其次，N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDAR）磷酸化後具有神經元毒性，有文獻報導TRPC可以對NMDAR的磷酸化進行調控，而鈣調磷酸酶（CN）也可以對NMDAR的磷酸化起到調控作用， CN與活化T細胞核因子（NFAT）的細胞定位密切相關。本課題擬利用CN拮抗劑(FK506)和激動劑(CHA)研究SAH後CN在TRPC1&4介導的神經保護作用，並探討TRPC1&4與CN、NMDAR和NFAT之間的聯繫。我們發現， 在SAH後72h，TRPC1&4蛋白水平的上調後CN活性顯著增高，TRPC1&4下調後CN活性顯著降低。TRPC1&4上調後NMDAR的磷酸化程度降低，TRPC1&4下調後NMDAR磷酸化程度增高。SAH後72h，TRPC1&4的siRNA組NMDAR磷酸化水平升高，siRNA+CHA處理組 NMDAR磷酸化水平較siRNA組低；TRPC1&4的過表達質粒組NMDAR磷酸化水平降低，過表達質粒+FK506組NMDAR磷酸化水平較過表達質粒組高。CN活性上調後胞核內的活化T細胞核因子（NFAT）蛋白水平升高，同時細胞總蛋白中TRPC1和TRPC4的蛋白水平升高；CN活性下調後胞核內的NFAT蛋白水平下降，同時細胞總蛋白中TRPC1和TRPC4的蛋白水平下降。綜上，在SAH後EBI過程中TRPC1&4的蛋白水平顯著上升，隨之CN活性增高，CN抑制NMDAR的磷酸化，從而阻斷了磷酸化NMDAR的神經毒性。而當TRPC1&4被下調時，CN活性降低，NMDAR磷酸化程度增高，隨之神經毒性加劇。
