《TRF2在放射性肺損傷中AEC和LFB凋亡調控中的作用及其機制研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由李楊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TRF2在放射性肺損傷中AEC和LFB凋亡調控中的作用及其機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李楊
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
放射性肺損傷（RPI）是制約腫瘤放療和放射損傷救治的瓶頸問題，其分子機制未闡明，無有效防治措施。前期研究提示TRF2與C57BL/6J小鼠易發肺纖維化相關，其沉默後成纖維細胞（LFB）凋亡率增加，基於TRF2參與DNA損傷反應及細胞凋亡和端粒功能調控，而前期研究表明肺泡上皮細胞（AEC）凋亡和LFB抗凋亡在RPI進程中發揮重要作用。本課題利用易/抗纖維化小鼠及其AEC和LFB，建立TRF2不同表達狀態的細胞和動物模型，以γ射線為損傷因素，通過細胞生物學行為、肺組織病理和呼吸功能改變等研究TRF2對細胞凋亡和RPI進程的調控作用；並通過TRF2磷酸化、端粒長度、端粒酶表達及活性、ABPs、PML、ECTR等檢測以及ATM、p-ATM、ATM與TRF2的相互作用、p53、p-p53、p53與TRF2相互作用等探討TRF2對兩種細胞凋亡調控的機制，以期闡明TRF2在RPI進程中的作用及其機制。
結題摘要
放射性肺損傷（RPI）是制約腫瘤放療和放射損傷救治的瓶頸問題，其發生髮展具有顯著的種屬和個體差異，此種差異存在的機制尚未揭示。肺泡上皮細胞（AEC）凋亡和成纖維細胞（LF）抗凋亡在RPI進程中發揮重要作用，DNA損傷是γ射線對細胞的直接損傷效應，既往研究提示TRF2可能與RPI種屬差異相關，其在DNA損傷修復和細胞凋亡中均發揮重要調控作用。本研究旨在探討TRF2在RPI種屬差異中的作用。方法：採用20 Gy 60Co γ射線照射C57BL/6J和C3H/HeN小鼠各50隻建立動物模型，原代分離培養C57BL/6J和C3H/HeN小鼠肺成纖維細胞，採用0、6和12Gy γ射線照射建立細胞模型。HE和天狼猩紅染色以及電鏡和羥脯氨酸含量檢測比較二者RPI進程差異；原位末端標記、電鏡和流式細胞儀檢測細胞凋亡；單細胞凝膠電泳和γ-H2AX表達的免疫螢光化學法染色進行DNA損傷分析；免疫印跡、免疫組織化學檢測蛋白表達；實時螢光定量PCR晶片分析TRF2及端粒調控相關基因的表達。結果：C57BL/6J小鼠照後16m肺組織病理改變經歷間質性炎症、細胞增生和纖維化，C3H/HeN小鼠照後16m肺組織為間質性炎症改變。兩種小鼠胸部受照射後不同時間肺組織中凋亡細胞的種類和凋亡率存在顯著差異，照後早期C57BL/6J小鼠肺泡上皮細胞凋亡顯著多於C3H/HeN小鼠，而照射後3m該小鼠又未能通過凋亡清除增生的巨噬細胞和成纖維細胞。兩種小鼠肺組織及分離的LFs照射前後TRF2及相關分子的表達變化存在顯著差異，照前高表達TRF2的C3H/HeN小鼠肺組織照後1m內仍高於C57BL/6J小鼠，但照後3m表達顯著低於後者，照射前後端粒及其相關調控網路存在多個差異基因。兩種小鼠LFs照後均發生DNA損傷，但C3H/HeN小鼠LFs照射後DNA損傷修復較C57BL/6J小鼠LFs需要時間更長，二者凋亡率均低於5%。照前胞漿高表達TRF2的C3H/HeN小鼠LFs照射後6h核呈強陽性，而C57BL/6J小鼠LFs於照射後6h胞漿弱陽性，胞核陰性；P-ATM變化規律與TRF2類似。結論：照射後C57BL/6J和C3H/HeN小鼠AEC凋亡和LFs抗凋亡及其DNA損傷修復的差異為二者易/抗纖維化的機制之一；TRF2在此差異中發揮調控作用。
