TR-FIA

TR-FIA，以常用螢光素作為標記物的螢光免疫測定往往受血清成分、試管、儀器組件等的本底螢光干擾，以及激發光源的雜射光的影響，使靈敏度受到很大限制。TR-FIA（timeresolvedfluorescenceimmunoassay，時間分辨螢光免疫測定）是針對這缺點加以改進的一種新型檢測技術。

概述

以常用螢光素作為標記物的螢光免疫測定往往受血清成分、試管、儀器組件等的本底螢光干擾，以及激發光源的雜射光的影響，使靈敏度受到很大限制。TR-FIA（timeresolvedfluorescenceimmunoassay，時間分辨螢光免疫測定）是針對這缺點加以改進的一種新型檢測技術。

TR-FIA的基本原理

TR-FIA的基本原理是以鑭系元素銪（Eu）螯合物作螢光標記物，利用這類螢光物質有長螢光壽命的特點，延長螢光測量時間，待短壽命的自然本底螢光完全衰退後再行測定，所得信號完全為長壽命鑭系螯合物的螢光，從而有效地消除非特異性本底螢光的干擾。時間分辨螢光免疫測定的測定原理見圖17-4。以雙抗體夾心法為例的測定反應程式見圖17-5。其中增強液的作用是使螢光信號增強。因為免疫反應完成後，生成的抗原－抗體－銪標記物複合物在弱鹼性溶液中，經激發後所產生的螢光信號甚弱。在增強液中可至pH2～3，銪離子很容易解離出來，並與增強液中的β-二酮體生成帶有強烈螢光的新的銪螯合物，大大有利於螢光測量。

圖17-4 時間分辨螢光免疫測定測定原理示意圖

圖17-5 雙抗體夾心法時間分辨螢光免疫測定反應程式示意圖

TR-FIA使用的儀器

TR-FIA所用檢測儀器為時間分辨螢光計，與一般的螢光分光光度計不同，採用脈衝光源（每秒閃爍1000次的氙燈），照射樣品後即短暫熄滅，以電子設備控制延緩時間，待非特異本底螢光衰退後，再測定樣品發出的長鑭系螢光。檢測靈敏度可達0.2～1ng/ml。