《TLR2介導的高脂高膽固醇誘導型NASH的發病機理》是依託西安交通大學，由李冬民擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TLR2介導的高脂高膽固醇誘導型NASH的發病機理
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李冬民
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
研究提示，TLR2上調與HFHC-NASH發生密切相關，但其上調機理不明。本課題擬用基因表達譜晶片和miRNA測序技術獲得HFHC-NASH模型大鼠原代肝枯否氏細胞基因和miRNA差異表達譜，結合預測信息、初篩出調節TLR2且差異表達的轉錄因子和miRNA、並分別定製晶片；用能使TLR2表達上調的LPS、膽固醇等影響因素處理NR8383巨噬細胞，用定製晶片篩出與TLR2表達上調相關的轉錄因子和miRNA，將其在NR8383細胞中過表達或抑制表達驗證其上調TLR2的作用，確定上調TLR2的關鍵轉錄因子和miRNA；通過CHIP、啟動子報告基因、EMSA、3'UTR報告基因等分析關鍵轉錄因子和miRNA調控TLR2表達的分子機制，明晰影響因素-關鍵轉錄因子/ miRNA-TLR2上調的分子機制，闡明TLR2介導的HFHC-NASH發病機理，為其防治提供新的藥物靶點和策略。
結題摘要
課題組前期用含2%膽固醇的高脂飼料飼餵近交系E3大鼠6個月成功構建非酒精性脂肪性肝炎模型（HFD-NASH），出現明顯的血脂紊亂、糖耐量受損、胰島素抵抗及NASH表型；Toll樣受體2（TLR2）在該模型肝中表達升高、且主要表達於肝枯否氏細胞；但其在HFD-NASH中作用及機制尚不清楚。 項目批准後，課題組利用RT-qPCR、Western blotting、啟動子螢光素酶報告基因、CHIP、基因過表達/低表達慢病毒載體等技術，主要研究了模型大鼠肝枯否氏細胞中上調TLR2的影響因素以及“影響因素-關鍵轉錄因子或miRNA- TLR2上調”的分子機制。結果發現：在HFD-NASH模型中，低表達的miR-144通過靶向結合TLR2 mRNA分子3’UTR區的減少而促進TLR2表達上調以及促炎因子TNF-α、INF-γ等的生成、進而引起NASH的發生；高表達的TGF-β、IFN-γ分別通過Smad3途徑、STAT1途徑顯著上調TLR2表達及促炎因子生成、進而引起NASH的發生；飲食因素高糖、高膽固醇分別通過CHREBP、CEBPα/β上調TLR2並引起下游促炎因子的生成；這些結果說明促炎因子、高糖、高膽固醇等多種因素通過關鍵轉錄因子或miRNA上調肝枯否氏細胞中TLR2表達並觸發炎症的發生。另外還發現，模型中上調的miR-497通過靶向胰島素受體導致肝胰島素抵抗的發生；膽固醇通過固醇感受器LXRα 及轉錄因子C/EBPβ上調lnc-HC（從用抑制性消減雜交成功構建的模型肝文庫中獲得並鑑定的一個新長鏈非編碼RNA）的表達，lnc-HC通過與hnRNPA2B1、靶基因Cyp7a1 和Abca1 的mRNA結合而降低靶基因的表達，最終逆向調控肝臟膽固醇代謝；這表明miR-497、lnc-HC參與了肝糖、膽固醇代謝調節，與HFD-NASH模型高血糖、高膽固醇血症密切相關，進而參與了肝TLR2表達上調，炎症激活及NASH的發生。 上述結果表明TLR2在HFD-NASH觸發過程中發揮著非常關鍵的作用，是防治NASH的潛在靶點。課題組針對TLR2胞外段製備的抗TLR2的單克隆抗體在體內外具有明顯的抗炎抗損傷作用；還可明顯降低HFD-NASH大鼠體重、肝重與空腹血糖，減少巨噬細胞的浸潤和肝臟促炎因子的表達，改善肝纖維化水平，而達到治療作用，為NASH的預防與靶向治療提供了新思路和新策略。
