《TAB3調控HOXB9在肝細胞癌侵襲和轉移中的作用及機制研究》是依託南昌大學，由袁榮發擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：TAB3調控HOXB9在肝細胞癌侵襲和轉移中的作用及機制研究
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：袁榮發
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們研究發現同源異型基因HOXB9可促進肝細胞癌的侵襲和轉移（Cancer Research, 2014），但HOXB9被調控機制尚未完全闡明。研究表明銜接蛋白TAB3在惡性腫瘤的發生髮展中起重要作用。預實驗結果提示TAB3在肝癌組織中過表達，且與HOXB9表達呈正相關；干擾肝癌細胞中TAB3表達可導致HOXB9表達下降，同時腫瘤細胞侵襲遷移能力下降。因此，我們推測TAB3通過調控HOXB9表達影響肝癌的侵襲和轉移。為驗證這一假設並探討其作用機制，本研究擬先採用基因轉染和RNA干擾技術，明確TAB3通過調控HOXB9表達對肝癌體外侵襲及體內轉移的影響；再利用螢光素酶報告基因及免疫共沉澱等方法探討TAB3調控HOXB9的具體機制；最後通過檢測肝癌組織中TAB3和HOXB9基因表達，分析兩者表達的關聯及作為肝癌術後轉移和預後標誌物的意義。本研究結果將為闡明肝癌的侵襲和轉移機制提供新的理論依據。
結題摘要
銜接蛋白TAB3和同源異型基因HOXB9均在惡性腫瘤的發生髮展中起重要作用。我們首先在體外和體內實驗中研究發現過表達TAB3可以明顯增加HOXB9的表達，同時肝癌細胞的侵襲和轉移能力明顯增加，而在過表達TAB3的同時干擾HOXB9的表達，發現HOXB9的表達明顯降低，且肝癌的侵襲和轉移能力明顯降低；其次我們在肝癌細胞中發現TAB3可以通過正向調節β-catenin/TCF4通路而調控HOXB9的表達；進一步研究TAB3調控β-catenin/TCF4通路的機制發現，加入蛋白酶體抑制劑MG132後，發現分別下調和上調肝癌細胞中TAB3的表達後對β-catenin的蛋白表達無影響；此外，利用放線菌酮（CHX）處理細胞後觀察β-catenin的降解速率，發現過表達TAB3的肝癌細胞中β-catenin的降解速率比空白對照組顯著減慢，表明TAB3參與了β-catenin蛋白的降解過程；我們進一步轉染外源性TAB3質粒（不同劑量）轉入肝癌細胞中，然後觀察內源性β-catenin的蛋白表達，發現隨著外源性TAB3質粒轉染劑量的增加，內源性β-catenin的蛋白表達逐漸升高。另外，我們同時轉染外源性β-catenin質粒和外源性TAB3質粒（不同劑量）至肝癌細胞中，然後觀察細胞中β-catenin的蛋白表達，發現隨著外源性TAB3質粒轉染劑量的逐漸增加，β-catenin的蛋白表達也逐漸升高，表明TAB3可以穩定β-catenin的蛋白表達。最後我們分別將TAB3干擾質粒和過表達質粒轉入肝癌細胞，並加入MG132處理，然後利用Co-IP分析β-catenin蛋白的泛素化水平變化，發現降低TAB3的表達可顯著增加β-catenin的泛素化水平，而過表達TAB3的表達可明顯抑制β-catenin的泛素化水平，表明TAB3可以通過調節β-catenin的泛素化水平而穩定β-catenin蛋白的表達。最後我們在150例臨床肝癌組織標本中發現TAB3和HOXB9均高表達且呈明顯正相關；TAB3和HOXB9共高表達與腫瘤的大小、衛星灶形成、血管侵襲及不良預後明顯相關。綜上所述，本課題的研究結果發現TAB3通過抑制β-catenin蛋白的泛素化降解增加其下游HOXB9的表達從而促進肝癌的侵襲和轉移，為β-catenin的調控提供了一條新途徑，有助於我們深入了解肝癌發生轉移的機制。
