T-SPOT.TB是一種γ干擾素釋放分析,用酶聯免疫斑點技術檢測對6 kD早期分泌靶向抗原和10 kD培養濾過蛋白肽段庫反應的T細胞以診斷結核感染。
基本介紹
- 外文名：T-SPOT.TB
- 研發單位：英國牛津大學
釋義
T-SPOT.TB檢測，採用T-SPOT.TB試劑盒(Oxford Immunote Ltd.英國)。抽取患者新鮮靜脈血, 分離外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs), 用AIM-V培養液重懸細胞, 製備成濃度為2.5×10/mL的細胞懸液。在已包被干擾素(IFN)-γ抗體微量板的4個孔中, 分別加入等量(50 μL)細胞懸液, 以AIM-V培養液作陰性對照, 植物血凝素作陽性對照, 結核桿菌特異混合多肽A抗原(ESAT-6)作測試孔A, 結核桿菌特異混合多肽B抗原(CFP-10)作測試孔B。將微量板放入37 ℃孵箱培養16~20 h後, 洗板並加入鹼性磷酸酶標記的二抗, 將培養板置於2~8 ℃孵育1 h後PBS洗板。最後加入BCIP/NBT底物工作液顯色, 於顯微鏡下計數判讀:若陰性對照孔斑點數為0~5個, 此時測試孔斑點數減去陰性對照孔斑點數≥6個; 或者當陰性對照孔斑點數≥6個, 此時測試孔斑點數≥2倍陰性對照孔斑點數時判定為陽性。
T-SPOT.TB試劑盒
T-SPOT.TB由英國牛津大學研發，檢測受試者是否存在結核分枝桿菌感染的體外診斷試劑。採用酶聯免疫斑點法（ELISPOT）定量檢測患者血液或體液標本中結核效應T細胞數，根據陽性細胞數（即顯色的斑點數）來判斷患者結核分枝桿菌感染狀態，輔助臨床診斷和排篩結核。
臨床意義及預期用途
結核感染的免疫應答反應以細胞免疫為主，作為免疫應答的一部分，T細胞受結核抗原刺激致敏，形成活化的效應T細胞，包括CD4和CD8，從全血中單獨被分離出來，在體外受特異抗原刺激並被計數。從結核分枝桿菌複合群（人型、牛型、非洲型）中選擇有用的抗原降低與BCG（卡介苗）和環境分枝桿菌的交叉反應提高特異性。兩個單獨的抗原模仿ESAT-6和CFP 10，聯合套用提高檢測靈敏度。
本產品用於檢測並計數人新鮮外周靜脈抗凝全血中的結核特異抗原刺激活化的效應T細胞。該產品用於檢測人外周抗凝全血中的結核特異抗原刺激活化的效應T細胞，僅適用於臨床疑似結核病的輔助診斷。
T-SPOT.TB是一種更簡單的酶聯免疫斑點（ELISPOT）檢測方法。ELISPOT檢測是高靈敏度的，在細胞分泌的細胞因子擴散稀釋前，其能夠立即捕獲細胞周圍所分泌的細胞因子。這使得ELISPOT檢測更加的靈敏，超過傳統的ELISA實驗。T-SPOT.TB被設計出來用於檢測結核特異抗原刺激活化的效應T細胞。T-SPOT.TB計數每個活化的結核特異效應T細胞。
原理及參數
干擾素-γ對於細胞內病原體（例如結核分枝桿菌）的免疫防禦至關重要。 感染後，幼稚T細胞開始對TB特異性抗原敏感，發展成TB特異性效應T細胞（CD4 +和CD8 +），然後遊走到感染部位並分泌干擾素-γ，以激活巨噬細胞吞噬和破壞分枝桿菌。 感染TB的患者的外周血中有TB特異性的效應T細胞，當被T-SPOT.TB的抗原（ESAT-6,CFP-10）刺激時，它們會在體外分泌干擾素-γ。T-SPOT.TB檢測直接捕獲單個TB特異性效應T細胞分泌的干擾素-γ。每一個斑點代表一個分泌細胞因子的T細胞，計數斑點數量可以獲得外周血中結核致敏的T細胞數量。
名稱及組成
結核感染T細胞檢測試劑盒（免疫斑點法），T-SPOT.TB，24人份/盒。
微孔培養板（96孔），結核桿菌特異混合多肽A（2瓶），結核桿菌特異混合多肽B（2瓶），陽性質控（2瓶），濃縮標記抗體（1管），顯色底物溶液（1瓶），CD光碟（1張）。
樣本要求：免疫力正常的患者，根據以下標準從靜脈血樣本中獲得足夠數量的外周血單個核細胞（PBMCs）用於實驗。
·成年人或10歲以上兒童：8mL靜脈血
·2-9歲兒童：4mL靜脈血
·2歲以下兒童：2mL靜脈血
實驗室表現：
美國FDA數據：特異性97.1%（297/306），靈敏度95.6%（175/183）；
國內CFDA數據：特異性94.1%（478/508），靈敏度95.3%（624/655）。
基本不受免疫力狀況影響
在實驗過程中儘可能去除干擾因素，包括：
細胞洗滌，去除血液內源性干擾因素，避免本底影響結果準確性；
細胞計數，保證足量細胞參與反應，提高免疫力異常人群檢測的準確性。
BCG接種人群的結核感染首選（美國CDC指南推薦）
相對於傳統的PPD、痰塗片和培養，T-SPOT.TB可以免於BCG接種和絕大多數環境分枝桿菌影響造成的假陽性，給出準確的診斷。
寫入國內外30多個結核感染檢測指南；
γ-干擾素釋放實驗在中國套用的建議（2014）；
HIV合併結核分枝桿菌感染診治專家共識（2017）
500+篇研究文獻，提供更多臨床證據
大多數實驗室通常可以在收到樣本後36-48小時內報告結果。
