《T細胞受體近端信號通路中SUMO化蛋白修飾的作用與機制》是依託中山大學，由李迎秋擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：T細胞受體近端信號通路中SUMO化蛋白修飾的作用與機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李迎秋
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
深入探討TCR信號通路調節機制是徹底理解T細胞免疫反應所必需。TCR近端信號傳導主要由蛋白磷酸化、泛素化、蛋白轉位和相互作用等方式介導。本項目根據前期工作基礎及SMUO化與泛素化通路的密切相關性，提出SUMO化蛋白修飾在T細胞受體近端信號通路中具有重要調節功能的構想。研究將首先分析可能調節TCR近端信號通路的SUMO亞型，構建干擾或超表達SUMO的穩定細胞株，利用蛋白組學方法及生物軟體預測，鑑定TCR近端信號通路中可發生SUMO化修飾的靶蛋白，分析其對T細胞信號通路與活化的影響及分子機制；探索靶蛋白SUMO化修飾與泛素化修飾的對話；篩選發生SUMO化修飾的靶蛋白的SUMO E3連線酶，闡明參與TCR近端信號通路的SUMO化修飾通路；進一步利用人原代T細胞驗證研究發現，系統地詮釋TCR近端信號通路中SUMO化修飾的作用與機制，豐富TCR信號通路基礎理論，為臨床上篩選藥物靶點提供新思路。
結題摘要
T淋巴細胞是適應性免疫系統的關鍵組成部分，它通過對相關抗原做出恰當的活化反應，進而統領協調機體免疫系統的各種免疫反應，保證機體有效清除入侵病原體或病變細胞，並避免自身免疫性疾病發生。T淋巴細胞的恰當活化有賴於T細胞受體信號通路複雜精細的調節方式。當T細胞表面的受體TCR與抗原呈遞細胞的抗原肽-MHC複合物結合時，T細胞與抗原呈遞細胞間會形成一個高度有序的融合結構——免疫突觸，其形成是T細胞活化及增殖所必需。SUMO化蛋白修飾調節細胞的許多活動， 但是它是否參與調節T淋巴細胞受體TCR近端信號通路和免疫突觸的形成尚不清楚。通過該課題的研究，我們發現，在受到抗原或TCR/CD28共刺激時，TCR信號通路中的關鍵蛋白激酶PKC-theta發生SUMO化修飾，且該修飾是SUMO1而非SUMO2/3修飾。經質譜分析以及進一步點突變鑑定，發現PKC-theta發生SUMO化修飾的2個主要胺基酸位點分別是Lys325 和 Lys506。 同時，我們通過過表達或RNA干擾幾種已知的SUMO E3 連線酶，尋找PKC-theta SUMO化修飾E3連線酶，發現SUMO E3 連線酶 PIASxb能夠與PKC-theta發生刺激誘導的結合，且調節PKC-theta SUMO化修飾。利用原代人或小鼠T 細胞分析PKC-theta發生SUMO化修飾對T細胞功能的影響，發現該修飾對T細胞活化和分化都是非常必要的。進一步進行體外激酶活性檢測及免疫共沉澱等分析其作用機制，發現PKC-theta的SUMO化修飾基本不影響PKC-theta激酶的生化活性，但是影響它與CD28及filamin A的結合併調節成熟免疫突觸結構的形成。我們的發現闡述了SUMO化修飾在免疫突觸形成以及T細胞活化中的重要性，闡明了T細胞活化的新機制，為相關免疫疾病的治療及藥物設計提供了新的思路。
