SphK1在肝衰竭枯否細胞TLR4通路介導炎症損傷中的作用機制

《SphK1在肝衰竭枯否細胞TLR4通路介導炎症損傷中的作用機制》是依託南昌大學，由雷延昌擔任項目負責人的地區科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：SphK1在肝衰竭枯否細胞TLR4通路介導炎症損傷中的作用機制
• 項目類別：地區科學基金項目
• 項目負責人：雷延昌
• 依託單位：南昌大學

項目摘要

在前期工作發現MHV-3感染和D-GalN/LPS急性肝衰竭小鼠和肝衰竭患者血清SphK1水平增高，SphK1抑制劑顯著降低血清HMGB1水平和提高肝衰竭小鼠生存率的基礎上。進一步研究SphK1和枯否細胞在D-GalN/LPS和MHV-3感染肝衰竭發生中的作用。體外細胞水平研究SphK1在LPS刺激枯否細胞和巨噬細胞NF-κB活化、HMGB1和炎症因子 (TNF-α,IL-1β、IL-6) 釋放中的作用以及對抗炎因子IL-10的影響。實驗研究SphK1是否通過TLR4信號通路PKCδ參與枯否細胞NF-κB活化以及SphK1在TNF-α刺激枯否細胞NF-κB活化、HMGB1釋放中的作用。進一步弄清SphK1在肝衰竭枯否細胞TLR4通路及其炎症損傷發生中的機制，為肝衰竭的治療提供新的干預靶點。

結題摘要

近來發現，SphK1在膿毒血症炎症反應中發揮重要作用，而急性肝衰竭具有相似的全身性炎症反應綜合症。前期發現急性肝衰竭小鼠PBMC表達SphK1升高，SphK1抑制劑（DMS）顯著降低血清HMGB1水平，提高生存率。 本項目建立和最佳化D-GalN/LPS誘導的BALB/c小鼠急性肝衰竭模型；氯化釓清除枯否細胞提高肝衰竭小鼠生存率、降低12h血清TNF-α,IL-1β、IL-6和HMGB1水平，減輕肝臟炎症壞死，降低肝臟SphK1表達。LPS刺激肝臟主要組成細胞（枯否細胞、原代肝細胞、肝星狀細胞）僅枯否細胞SphK1表達，免疫組化示肝細胞表面無SphK1表達。表明，肝臟SphK1表達主要來源為枯否細胞。 LPS刺激枯否細胞12h 的TNF-α、IL-1β、IL-6和HMGB1水平顯著升高； Sphk1-siRNA和DMS降低上述細胞因子水平。 DMS降低急性肝衰竭小鼠血清S1P水平，提高生存率，降低12h血清ALT/AST、TNF-α，IL-β和IL-6和HMGB1水平，減輕肝組織炎症壞死和肝細胞HMGB1胞漿移位。提示枯否細胞SphK1活化在急性肝衰竭中具有重要作用。 磷酸化PKC-δ在急性肝衰竭小鼠PBMC和肝組織表達，PKC-δ抑制劑Rottlerin提高生存率，降低12h的血清ALT/AST水平、血清炎症因子(TNF-α，IL-β和IL-6)和HMGB1水平以及36h肝組織炎症壞死。LPS刺激小鼠枯否細胞PKC活性增加，SphK1 -siRNA和DMS抑制LPS刺激的PKC活性；重組人PKCδ和S1P共孵育， PKC活性升高。DMS抑制PBMC和肝組織PKC-δ活化，DMS和Rottlerin均可抑制LPS刺激枯否細胞NF-κB的活性。提示，SphK1依賴PKC-δ活化促進枯否細胞NF-κB活性參參與急性肝衰竭炎症反應。 TNF-a刺激小鼠枯否細胞SphK1表達和HMGB1水平升高，NF-κB活性增加。SphK1-siRNA和 DMS對TNF-a刺激枯否細胞HMGB1和NF-κB活性無影響。提示，SphK1不參與枯否細胞TNF-a信號通路NF-κB活化。 綜上所述，枯否細胞SphK1活化促進PKC-δ磷酸化，進而促進NF-κB和炎症因子釋放在急性肝衰竭中具有重要作用。進一步明確SphK1在肝衰竭枯否細胞TLR4通路炎症損傷發生中的機制，為治療提供新的干預靶點。