《Sohlh2在精原幹細胞分化中作用和作用機制的實驗研究》是依託山東大學，由郝晶擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Sohlh2在精原幹細胞分化中作用和作用機制的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：郝晶
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Sohlh2(Spermatogenesis and oogenesis hlh transcription factor 2)是一個促進精原細胞分化的關鍵基因。申請者建立了sohlh2基因敲除小鼠，通過基因晶片技術分析sohlh2+/+和sohlh2-/-睪丸差異表達基因，證實sohlh2缺失可促進精原幹細胞(SSCs)特異基因oct4,sox2等表達，且SSCs數量明顯增加。為進一步闡明sohlh2在SSCs分化中的作用及其機制，我們將建立SSCs細胞系，通過SSCs基因轉染和RNAi方法，檢測sohlh2、oct4和sox2在SSCs自我更新和分化中的作用；並用啟動子luciferase報告系統，分析sohlh2與oct4/sox2之間的表達調控關係，從而揭示SSCs增殖和分化的分子調控機制，為闡明精子發生機制、精原細胞瘤的形成機制，以及為男性不育的基因診斷和治療提供理論和實驗依據。
結題摘要
Sohlh2(Spermatogenesis and oogenesis basic helix-loop-helix transcription factor 2)是調控精原細胞分化的關鍵基因。根據前期的實驗結果，sohlh2-/-小鼠睪丸中精原幹細胞( Spermatogonial stem cell,SSCs)特異基因oct4,sox2,GFRa1等表達明顯增加，且SSCs數量增多。本課題深入研究了sohlh2在體外SSCs分化過程中的作用，以及與SSCs自我更新相關基因oct4和sox2的相互作用，進一步闡明了SSCs自我更新和分化的分子調控機制。 利用建立的野生型和sohlh2-/-SSCs細胞系，通過基因轉染、RNA干擾、免疫螢光染色和FACS等方法，檢測了sohlh2在體外SSCs自我更新和分化過程中的作用。結果顯示，sohlh2不影響SSCs的自我更新，但可促進SSCs分化；通過RNA干擾oct4和sox2表達，證實了oct4可通過抑制sohlh2和c-kit表達，促進SSCs的自我更新，但sox2促進SSCs自我更新的作用不明顯；通過染色質免疫共沉澱（CHIP）的方法，證實了作為轉錄因子的sohlh2和oct4之間無直接的調控作用，sohlh2是通過直接作用於c-kit啟動子，上調c-kit表達，從而促進SSCs分化。本研究不僅揭示了sohlh2在SSCs分化過程中的作用和作用機制，而且有助於闡明精子發生的分子調控機制，為男性不育症的基因診斷和治療提供實驗依據。 另外，根據實驗結果，增加了部分實驗內容，如支持細胞分泌因子BMP4對SSCs分化的影響及sohlh2表達的調控，支持細胞增殖的調控機制，sohlh2在人睪丸組織中的表達狀況等，這些實驗為我們深入和全面了解SSCs自我更新和分化機制，以及了解sohlh2在人精子發生中的作用提供了實驗依據。 本課題培養碩士研究生2名，在國內外核心刊物發表論文4篇，SCI收錄2篇。
