Soares法

Soares 法：由於PCR 對不同長度的DNA 分子可能存在不均一擴增，Soares 等使用單鏈環狀DNA和由它製成的小片段DNA 作為雜交用DNA鏈。先按常規方法以phagemid為載體的直接CDNA 文庫作為起始文庫。Phagemid 在輔助噬菌體的幫助下，可產生含插人片段的單鏈環狀拷貝。收集這些單鏈環，純化，作為模板，以DNA 聚合酶、製作直接CDNA 文庫時用於mRNA 反轉錄的引物，以及混有ddNTP(ddTTP 除外)的dNTP 在載體上的插人片段區域進延伸長度控制在(200 土20)nt.這樣就形成了含部分雙鏈的單鏈環狀DNA 分子。

用行延伸，以及延伸引物封閉雜交分子中的非羥基磷灰石色譜回收純化這些分子，變性，用(dT)2530特異性位點，復性。復性完成後用羥基磷灰石色譜回收純化純粹的單鏈環狀分子，隨機引發有限延伸後(該步有利於提高轉化效率)轉人受體菌，製成文庫。重複上述過程可提高標準化程度。插人片段平均長度1.7kb左右，豐度變異係數由起始文庫的大於7000克隆雜交和測序顯示，路至一輪標準化後的140及兩輪標準化後的26。