Sanger\x27s法

Sanger是英國生物化學家利用酶解圖譜法確定了RNA中各種鹼基的排列順序和DNA中核甙酸的排列順序Sanger酶學法的原理[2]即用雙脫氧核苷酸作為鏈終止試劑,通過聚合酶的引物延伸產生一系列大小不同的分子後再進行分離的方法。測序引物與單鏈DNA模板分子結合後,DNA聚合酶用dNTP延伸引物。延伸反應分四組進行,每一組分別用四種ddNTP中的一種來進行終止,再用PAGE分析四組樣品。雙脫氧核苷酸在脫氧核糖上沒有聚合酶延伸鏈所需要的3’-OH基團,所以可被用作鏈終止試劑。從得到的PAGE膠上可以讀出我們需要的序列

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