《SUZ12 ceRNAs參與miR-320a調控舌鱗癌tumor budding侵襲轉移的分子機制》是依託中山大學，由謝楠擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：SUZ12 ceRNAs參與miR-320a調控舌鱗癌tumor budding侵襲轉移的分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：謝楠
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
課題組前期研究證實tumor budding代表惡性程度更高的癌細胞亞群，與舌鱗癌侵襲轉移、預後密切相關。但調控其惡性進展的分子機制尚不明確。雷射捕獲顯微切割結合miRNA晶片顯示tumor budding有特徵性miRNA表達譜，其中miR-320a等下調。進一步研究證實miR-320a靶向SUZ12抑制舌鱗癌侵襲轉移；轉錄組晶片顯示tumor budding中LncRNA H19、LINC00449、MMP2、FOSL1等表達上調；生物信息學分析顯示上述分子均與SUZ12對miR-320a有相同應答元件；提示SUZ12可能通過miR-320a與侵襲轉移、EMT相關分子互為ceRNA。在此基礎上，本課題擬篩選與SUZ12競爭性結合miR-320a的ceRNAs，研究其對tumor budding及侵襲轉移的調控機制，結合tumor budding評價其在預測舌鱗癌患者預後轉歸中的價值。
結題摘要
本課題成功篩選到與SUZ12競爭性結合miR-320a的ceRNA，即Midkine（MDK）。體、內外實驗發現其抑制舌鱗癌細胞的侵襲和轉移，並與舌鱗癌患者惡性進展密切相關。初步建立了miR-320a、SUZ12、MDK及侵襲、轉移相關分子的相互調控網路。目前取得的進展如下：1.體外實驗再次驗證miR-320a抑制舌鱗癌細胞的遷移、侵襲，下調VIM和CTNNB1的表達。2.在CAL-27中轉染miR-320a-3p mimics，轉錄組測序檢測表達譜變化。結合常用miRNA靶基因資料庫（mirtarbase、TargetScan7、miRDB）進行分析，篩選具有三個以上交集靶基因。分析部分基因和SUZ12對於miR-320a的MRE，綜合其在腫瘤惡性進展中作用及驗證結果，選擇MDK作為目標ceRNA。3.體外實驗研究結果顯示干擾MDK可下調舌鱗癌細胞CAL-27和SCC9的增殖、遷移和侵襲，降低遷移、侵襲相關基因VIM、CTNNB1、MMP2、MMP9、N-cadherin、FOSL1的表達。4.下調MDK建立穩定表達細胞株CAL27-shMDK，動物實驗評估其對舌鱗癌細胞成瘤和轉移的影響，發現MDK下調可降低舌鱗癌細胞轉移能力。Western blot檢測MDK干擾株MDK下游通路蛋白表達，發現PDK、AKT、pAKT表達均下降，說明MDK可能通過AKT信號通路，參與調控舌鱗癌的惡性進展。以上結果聯合生物信息學分析，初步建立了miR-320a、SUZ12、MDK及侵襲、轉移相關分子的相互調控網路。5.舌鱗癌標本驗證SUZ12、MDK及miR-320a之間的相關性，三者與患者臨床病理參數和預後的關係。免疫組化染色顯示MDK在舌鱗癌細胞的胞核和胞漿中表達，空間分布與Suz12在舌鱗癌組織中表達位置相似。生存曲線分析顯示MDK低表達組的生存率高於MDK高表達組，MDK低表達同時tumor budding少的患者生存率高於MDK高表達同時tumor budding多的患者。多因素分析顯示MDK是影響舌鱗癌患者預後的獨立因素。6.按照ITBCC(2016)推薦的評分系統，評價tumor budding在舌鱗狀細胞癌中的意義和價值。結果表明ITBCC評分系統是一種簡便、可靠、重複性好的舌鱗癌tumor budding檢測方法，推薦納入常規病理報告。
