《SUMO1修飾NADPH氧化酶調控顆粒細胞內ROS生成的實驗研究》是依託華中科技大學，由賴巧紅擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：SUMO1修飾NADPH氧化酶調控顆粒細胞內ROS生成的實驗研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：賴巧紅
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
降低促排卵過程中顆粒細胞內活性氧自由基(ROS)水平將改善卵子質量，提高IVF-ET妊娠率。SUMO化修飾對ROS的產生具有調控作用，但在顆粒細胞氧化應激狀態下的功能尚不明了。我們發現ROS水平升高將激發SUMO化結合增強，SUMO1的強表達有效抑制了顆粒細胞凋亡，因而提出SUMO1抑制ROS生成，對顆粒細胞產生保護效應的假設。為此我們構建了Ad-SUMO1腺病毒載體並建立了顆粒細胞內誘導性Ubc9基因敲除小鼠模型，擬從體內和體外兩方面研究SUMO1過表達和去表達對顆粒細胞內ROS生成的影響。同時，在機制研究中我們發現NADPH氧化酶可能是SUMO1修飾的底物蛋白。我們將通過免疫共沉澱、螢光定位和構建SUMO1突變體等分子生物學手段探尋和反證SUMO1與NADPH氧化酶結合的亞基（Rac1或p47phox等）和序列，希望揭示SUMO1抑制ROS的途徑和靶點，為臨床抗氧化治療提供新思路。
結題摘要
改善體外受精-胚胎移植（IVF-ET）治療過程中的卵子質量是提高妊娠率的關鍵。卵母細胞在促排卵過程中可能受活性氧自由基（ROS）損傷，導致質量下降。降低卵母細胞周圍顆粒細胞層的ROS水平對改善卵子質量有重要意義。本項目通過臨床標本檢測和體外實驗證實了顆粒細胞內高ROS水平導致細胞凋亡，降低卵母細胞活性，降低患者臨床妊娠率。在體外實驗中發現高ROS水平激發了SUMO1的增強表達，SUMO1的強表達有效抑制了顆粒細胞凋亡，驗證了我們之前提出的假設：SUMO化修飾對顆粒細胞起保護作用。在進一步的機制探索階段，我們發現ROS來源之一的NADPH氧化酶的多個亞基在顆粒細胞內有表達，在高ROS狀態表達增強；NADPH氧化酶特異性的抑制劑能夠有效降低ROS水平。因此，SUMO1可能是通過修飾NADPH氧化酶來發揮對ROS的調控的。我們進而通過免疫共沉澱方法檢測到SUMO1與NADPH氧化酶的結合亞基Rac1,又構建了Rac1的突變體，反證Rac1是結合靶基。這對於後續的臨床轉化研究有重要意義，提供了進行臨床治療的理論依據及作用靶點。
