SPRY1對銀屑病皮膚固有免疫的影響及機制研究

項目摘要

銀屑病是一種多基因遺傳的、環境因素刺激誘導的免疫異常性慢性增生性皮膚病，固有免疫、適應性免疫及皮膚屏障相關基因在銀屑病的發病中發揮重要的作用。銀屑病中固有免疫如何影響適應性免疫應答並進而導致皮損發生的機制不明確。Sprouty 1 (SPRY1) 是一種富含半胱氨酸的蛋白質，我們的初步研究發現，在正常皮膚中，SPRY1位於表皮顆粒層；而在銀屑病表皮中，SPRY1表達水平降低或缺失。而且，我們通過RNAseq發現，SPRY1與固有免疫相關分子密切相關。因此，為了進一步闡明SPRY1在銀屑病皮膚固有免疫中的作用及機制，我們以銀屑病皮損及SPRY1轉基因和基因敲除小鼠為模型，探討SPRY1在調節皮膚屏障功能基因、固有免疫分子、角質形成細胞分泌的細胞因子和趨化因子等方面的作用，明確SPRY1改變對固有免疫細胞趨化的影響；探索創傷、感染及咪喹莫特等誘發銀屑病表型產生的新機制，發現治療銀屑病的新靶標。

結題摘要

本研究以免疫組化及免疫螢光明確SPRY1在正常人皮膚及角質形成細胞中的定位及表達；分離培養正常人角質形成細胞，WB及qRT-PCR法檢測SPRY1與細胞分化相關性；免疫組化及免疫螢光檢測銀屑病、濕疹、結節性痒疹患者皮損中SPRY1的表達及定位，RNAseq、qTR-PCR、WB法明確SPRY1在銀屑病患者皮損區角質形成細胞與正常人角質形成細胞中的表達差異；將LPS、Poly I:C、雙氧水及炎症因子（IL-6、IL-17A、IL-23、TNFα）及銀屑病治療藥物（氯倍他索、 MTX、卡泊三醇、阿維A）與體外培養的正常人及銀屑病患者皮損區角質形成細胞共孵育，以WB及qRT-PCR法比較以上處理因素對SPRY1在相應角質形成細胞中表達的影響；以免疫螢光檢測SPRY1與抗菌肽LL37在正常人及銀屑病患者組織及銀屑病患者鄰近皮損區角質形成細胞中的表達與定位；構建小鼠創傷模型，通過Masson三色染色、免疫組化及WB比較SPRY1轉基因小鼠與WT小鼠創傷癒合過程中的差異；以IMQ構建小鼠銀屑病模型，通過皮損區HE 染色比較表皮厚度、真皮血管數量，免疫螢光及qRT-PCR比較造模後SPRY1的表達差異，qRT-PCR及ELISA方法比較炎症因子、表皮屏障、固有免疫等相關基因及蛋白的改變；以流式細胞技術檢測造模後真皮、皮膚引流淋巴結及外周血中炎症細胞的改變。結果發現：1、SPRY1連續表達於人皮膚顆粒層，參與角質形成細胞晚期分化；2、在銀屑病患者皮損區SPRY1表達減少或缺失，藥物治療後的皮損區SPRY1表達恢復；3、LPS、Poly I:C、H2O2及銀屑病相關炎症因子抑制正常人角質形成細胞SPRY1的表達；氯倍他索、MTX、卡泊三醇及阿維A可促進銀屑病皮損區角質形成細胞SPRY1的表達；4、抗菌肽LL37抑制正常人角質形成細胞中SPRY1表達；5、過表達SPRY1可促進C57BL/6小鼠皮膚中表皮角質形成細胞凋亡、抑制表皮增殖，影響表皮分化。6、表皮特異性地過表達SPRY1延遲C57BL/6小鼠皮膚創傷癒合，影響創緣肉芽組織成熟機化，抑制增生表皮的爬行；7、過表達SPRY1減輕IMQ誘導的C57BL/6小鼠銀屑病樣皮炎表型，影響表皮屏障、固有免疫相關基因的表達，此外還抑制了小鼠真皮中IL-17A+γδT細胞增加及moDCs的聚集。因此，SPRY1在銀屑病中發揮負向調節的機制

SPRY1對銀屑病皮膚固有免疫的影響及機制研究

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