《SPNS2突變造成大鼠EOB表型的分子機制研究》是依託華南理工大學，由王鍵擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：SPNS2突變造成大鼠EOB表型的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王鍵
- 依託單位：華南理工大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
S1P是機體重要的脂質信號分子，通過細胞外或細胞內途徑發揮功能。EOB（eye-open at birth）是一種眼瞼發育障礙，同時也是一個重要的動物模型，其所揭示的規律對皮膚傷口癒合及腫瘤細胞遷移具有重要的指導作用。SPNS2是最近發現的一種S1P的轉運體，SPNS2突變造成血中S1P水平降低，影響淋巴細胞遷移和血管發生。我們發現並鑑定一種Spns2突變大鼠，其EOB的發生率為100%。預實驗研究發現：胚胎階段給予S1P或EGFR的配體可以挽救SPNS2突變大鼠的EOB表型；SPNS2突變的角質細胞中缺乏肌動蛋白應力纖維，提示：SPNS2轉運S1P在角質細胞遷移過程中發揮重要作用，並且EGFR信號通路可能參與其間。本課題擬利用該SPNS2突變大鼠EOB模型，採用組織培養和細胞培養的方法，詳細闡明SPNS2轉運S1P影響角質細胞遷移的分子機制，為今後以SPNS2為靶點的臨床套用奠定基礎。
結題摘要
一種轉基因綠色螢光大鼠（綠大鼠）在實驗過程中發現：當綠大鼠和綠大鼠交配後，總會有幾隻後代眼睛存在問題。後經過仔細的系譜分析後，發現大鼠基因組上的一個隱性基因被EGFP插入突變了。因此我們非常感興趣到底是哪個基因突變後可以出現上述症狀。主要研究內容：突變基因的定位、EOB表型的發現和分析、分子機制的解析等重要結果：我們成功定位該基因，並發現是Spinster homolog 2 （Spns2），是定位於細胞膜上，是sphingosine-1-phosphate （S1P）的轉運體。進一步分析spns2基因突變後的大鼠表型發現：該動物發育過程中發生眼瞼無法閉合的現象，從而造成EOB （eye open at birth）。進一步發現，spns2突變後，造成細胞內生成的S1P無法轉運到細胞外；S1P是主要通過S1PR1-3發揮上述作用，它們是通過轉激活EGFR受體來發揮作用的。具體的機制如下：S1P激活其受體後，引起MAL和c-Jun的核轉位，造成miR21和miR222的高表達，從而抑制TIMP3的表達，最終激活金屬蛋白酶ADAM10和ADAM17，從而釋放更多的EGFR的配體。當Spns2突變後，S1P的降低，從而引起EOB科學意義：EOB是一種非常好的動物模型，其發生機理和神經管閉合以及傷口癒合等過程非常相似，研究詳細解析了S1P轉運體spns2對細胞遷移的作用；另一個意義就是發現一種spns2突變的大鼠，該綠大鼠是一種套用非常廣泛的工具鼠，主要在細胞移植等研究領域。由於之前並不知道該動物存在spns2基因的插入突變，因此對於上述的研究的結果需要慎重對待。
