《SOCs在乙醇誘導的肝細胞鈣超載中的作用及其調節》是依託山東大學，由閻明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：SOCs在乙醇誘導的肝細胞鈣超載中的作用及其調節
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：閻明
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
酒精性肝病（ALD）已漸成為我國繼病毒性肝病之後的第二大肝病，但其肝損傷機制仍不明確，因而其治療缺乏特異性及有效性。本課題組前期通過建立ALD大鼠模型，發現乙醇誘導肝細胞鈣超載與線粒體及肝細胞損傷有關，並在本項目的預實驗中在HepG2肝癌細胞系中首次證實了酒精刺激下鈣池操縱的鈣離子通道（SOCs）表達增加與肝細胞鈣超載及損傷有關。為探明正常肝細胞是否遵循上述機制而致肝損傷及SOCs開放的調節機制，本課題擬複製乙醇誘導的體外原代肝細胞損傷模型及體內ALD模型，採用分子生物學、流式細胞儀、RNA干擾等技術，從整體-細胞-分子三個層次，揭示酒精刺激下SOCs的開放對肝細胞鈣超載的影響及其調節機制，並同時觀察特異性鈣通道阻斷劑在此過程中的干預作用，以闡明ALD發生的信號傳導通路及分子機制，為其防治提供新靶點。
結題摘要
酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是由於長期過量飲酒所致的慢性疾病, 隨飲酒量的增加及飲酒史的延長而逐漸表現為脂肪肝→酒精性肝炎→酒精性肝纖維化→酒精性肝硬化等。ALD已漸成為我國繼病毒性肝病之後的第二大肝病，但其肝損傷機制仍不明確，因而其治療缺乏特異性及有效性。本課題組前期通過建立 ALD 大鼠模型，發現乙醇誘導肝細胞鈣超載與線粒體及肝細胞損傷有關，並在本項目的預實驗中在 HepG2 肝癌細胞系中首次證實了酒精刺激下鈣池操縱的鈣離子通道（store-operated calcium channels, SOCs）表達增加與肝細胞鈣超載及損傷有關。為探明正常肝細胞是否遵循上述機制而致肝損傷及 SOCs 開放的調節機制，本課題通過複製乙醇誘導的體外原代肝細胞損傷模型及體內 ALD 模型，採用分子生物學、流式細胞儀、RNA 干擾等技術，從整體-細胞-分子三個層次，揭示了酒精刺激下 SOCs 的開放對肝細胞鈣超載的影響及其調節機制，並同時觀察特異性鈣通道阻斷劑在此過程中的干預作用，以闡明 ALD 發生的信號傳導通路及分子機制，為其防治提供新靶點。相關研究結果如下：（1）在正常肝細胞中及體內試驗中，乙醇可濃度依賴性的降低肝細胞的存活率，升高培養基上清及血清中轉氨酶的水平，並增加了胞漿中游離鈣離子的濃度；同時乙醇可明顯的增高 SOCs相關蛋白分子 STIM1、Orai1 的基因及蛋白表達，說明 SOCs可能參與乙醇誘導的肝細胞鈣超載及損傷。（2）體內外實驗均發現：與乙醇刺激組相比，SOCs阻斷劑及 sh-RNA 干擾後，可明顯的降低胞漿中游離鈣離子的濃度，升高細胞存活率，並降低轉氨酶的水平，且各阻斷劑之間沒有顯著地統計學上的差別，進一步證實了SOCs在乙醇誘導肝細胞鈣超載中的作用，進一步說明了 SOCs可能在乙醇導致的肝細胞的損傷中發揮作用。（3）在體外實驗中發現：EC50濃度（100mM）的乙醇明顯增加了線粒體內膜上的 Ca2+單向轉運體（MCU）的基因及蛋白的表達量；與乙醇刺激組相比，MCU通道劑特異性抑制劑（Ru360）處理可升高細胞存活率，增加ATP的生成，從而使依賴ATP的內質網 Ca2+-ATP 酶（SERCA）活性增加，減少胞外鈣離子通過SOCs的內流，進一步明確MCU、SERCA可能在酒精刺激導致SOCs持續開放中發揮作用。
