《SIRT1/NICD/Smad3通路在放射性肺纖維化中的作用及分子機制》是依託華中科技大學，由褚倩擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：SIRT1/NICD/Smad3通路在放射性肺纖維化中的作用及分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：褚倩
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Smad3蛋白調控的上皮間充質轉化（EMT）是放射性肺纖維化（RIPF）的關鍵機制之一。SIRT1是新發現的臍靜脈血管內皮細胞中的Notch受體胞內域（NICD）的內源性負調控子。課題組前期研究發現人II型肺泡上皮細胞中存在SIRT1，NICD可磷酸化Smad3。據此,本研究假設：放射線誘導SIRT1突變、喪失去乙醯化功能，NICD激活，磷酸化Smad3，觸發EMT，引起RIPF。本研究擬採用轉染技術，分別構建SIRT1、NICD基因缺失或高表達細胞，採用qRT-PCR、蛋白印跡、免疫沉降、免疫螢光、劃痕實驗、Transwell實驗研究SIRT1/NICD/Smad3通路的關鍵點調控和下游EMT效應，及在RIPF形成中的作用；利用大鼠放射性肺纖維化模型，行影像學和病理學對照研究，檢測SIRT/NICD/Smad通路及下游蛋白在肺組織中的表達與結合。驗證本假設，以期找到干預RIPF的分子靶點
結題摘要
Smad3蛋白調控的上皮間充質轉化（EMT）是放射性肺纖維化（RIPF）的關鍵機制之一。SIRT1是新發現的臍靜脈血管內皮細胞中的Notch受體胞內域（NICD）的內源性負調控子。課題組給予肺泡上皮細胞BEAS-2B和肺腺癌細胞A549 2Gy X線照射，照射後24小時，Notch1、Hes1、Hes2、p-Smad2/3、Vimentin表達升高，E-cadherin表達下降。在Notch1基因過表達肺泡上皮細胞BEAS-2B和肺腺癌細胞A549中，照射後24小時Notch1、Notch2、Hes1、Hes2、p-Smad2/3、Vimentin表達升高，E-cadherin表達下降。同時，課題組發現SIRT1激活後，通過AMPK/mTOR通路增加A549細胞放療敏感性。課題組利用13Gy X線照射建立的C57BL/6小鼠放射性肺纖維化模型，發現全胸照射後小鼠肺組織Notch1、Hes1、Hes2表達升高，證實在小鼠放射性肺損傷模型中存在Notch通路激活。放療後Notch信號的表達先降低，後升高，E-cadherin在放療後1月即降低，3月回升，後持續降低；Vimentin在放療後1月稍降低，後持續升高。課題組研究證實放射線激活肺上皮細胞Notch信號通路，並促進磷酸化Smad2/3表達，導致肺上皮細胞發生EMT；Notch1可激活肺上皮p-Smad2/3表達，並誘導EMT轉化。 本研究創新性地發現Notch信號通路是放射性肺纖維化的新的分子機制，為尋找預防RIPF的途徑提供了新依據和新策略。
