《SERPINA3K抑制角膜緣微環境功能障礙及其機制研究》是依託廈門大學，由胡皎月擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：SERPINA3K抑制角膜緣微環境功能障礙及其機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：胡皎月
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
角膜緣幹細胞缺乏是嚴重的致盲性眼病，部分是由於角膜緣微環境功能障礙而引起，主要表現為炎症細胞浸潤、纖維組織增生及新生血管形成。絲氨酸蛋白酶抑制劑SERPINA3K具有抗炎、抗纖維化及抗新生血管等功能，具有抑制角膜緣微環境功能障礙的可能性。我們研究證實，局部套用高濃度苯扎氯銨可導致角膜緣微環境功能障礙，引起幹細胞缺乏的病理表現。本項目以小鼠角膜緣微環境功能障礙模型為研究對象，裂隙燈顯微鏡觀察角膜上皮缺損，基質新生血管及角膜上皮結膜化等，通過動物實驗和組織塊培養，用免疫螢光染色、Western blot等方法，探討角膜緣微環境發生細胞凋亡、炎症反應及新生血管等，同時檢測Wnt信號通路激活情況；分析局部套用SERPINA3K後，角膜緣微環境和幹細胞功能恢復情況及其調控機制。本研究不但有助於闡明角膜緣微環境功能障礙導致幹細胞缺乏的發病機制，而且有望為臨床上治療相關疾病提供一種新的手段。
結題摘要
第一部分：高濃度BAC誘導小鼠角膜緣幹細胞缺乏動物模型 目的：建立BAC誘導的角膜緣幹細胞缺乏小鼠模型。 方法：0-0.5%的BAC滴眼液給小鼠點眼4周，裂隙燈觀察角膜新生血管、炎症及角膜上皮狀態，在第4周和第12周，取眼表組織進行染色，投射電鏡觀察角膜緣形態結構，眼表印記細胞進行PAS染色。 結果：0.5%的BAC滴眼液點眼，每天4次，共28天成功誘導了角膜緣幹細胞缺乏的表現，包括角膜新生血管，角膜基質炎症，角膜上皮細胞缺失，角膜上皮K19和K13染色陽性。角膜緣P63，ABCG2表達降低。投射電鏡顯示角膜緣基底膜結構紊亂，細胞不規則。在0.5%的BAC組，BAC點眼28天后，角膜上皮PAS染色陰性，但是BAC撤退8周后，PAS染色陽性，K10染色陽性，而K12染色陰性。 結論：局部套用高濃度的BAC可以誘導小鼠角膜緣幹細胞缺乏的臨床表現，可以作為研究角膜緣幹細胞缺乏病理機制和治療的基礎。 第二部分：SA3K抑制TNF-α誘導的兔角膜內皮細胞屏障功能的破壞 目的：本研究旨在探討SA3K對TNF-α誘導的兔角膜內皮細胞屏障功能的保護作用。 方法：紐西蘭大白兔角膜組織塊培養，實驗分4組：陰性對照組，TNF-α組，TNF-α+低濃度SA3K組，TNF-α+高濃度SA3K組。通過檢測角膜內皮對FITC-右旋糖酐的滲透來評價角膜內皮屏障功能。角膜組織鋪片免疫螢光方法檢測緊密連線蛋白ZO-1、粘著連線蛋白VE-cadherin、纖維肌動蛋白和微管結構蛋白的形態和分布，Western blot分析和RT-PCR檢測ZO-1、VE-cadherin、MLC及p-MLC等蛋白表達量的變化。 結果：TNF-α劑量依賴性地誘導角膜內皮對FITC-右旋糖酐的滲透性增加， SA3K抑制TNF-α對角膜內皮屏障功能的破壞。TNF-α誘導ZO-1和VE-cadherin的分布紊亂、F-actin和microtubule的結果破壞，而對ZO-1和VE-cadherin的mRNA和蛋白表達量都沒有影響。Western blot分析顯示，SA3K抑制TNF-α誘導的p-MLC的增加，而對總MLC的表達量沒有影響。 結論：SA3K抑制MLC的激活、維持角膜內皮屏障結構和功能的完整性，減少TNF-α的破壞作用，可能具有重要的臨床套用價值。
