《Rpf結構域突變體的功能及其對MTB休眠菌復甦的影響》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由師長宏擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Rpf結構域突變體的功能及其對MTB休眠菌復甦的影響
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：師長宏
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
結核分枝桿菌（MTB）可分泌5種促休眠菌復甦的蛋白-Rpf樣蛋白，該類蛋白誘導產生的抗體能抑制MTB的生長，有望用於MTB的免疫治療，但必須去除其復甦休眠菌的功能。由於5種Rpf樣蛋白在功能上有一定的重疊，剔除單個編碼基因並不影響MTB的生長，而Rpf結構域具有與Rpf樣蛋白相似的功能，因此本研究在已獲得多種Rpf結構域突變體的基礎上，擬利用MTB體外休眠菌模型篩選出對休眠菌無復甦作用，但其相應抗體能特異性封閉5種Rpf樣蛋白的突變體，有效抑制MTB的生長和休眠菌的復甦；觀察該突變體的酶活性變化和抗體親合力；研究突變體在小鼠體內誘導產生的免疫應答和保護力；通過小鼠MTB急性感染模型、持續性感染模型和潛伏感染模型，明確突變體對體內MTB的生長和休眠菌復甦的抑制作用；探索該突變體對休眠相關基因表達水平的影響，為利用Rpf結構域突變體治療MTB休眠菌持續性感染提供理論和實驗依據。
結題摘要
完成了契約書中規定的研究內容，具體包括：表達純化了結核分枝桿菌中5種Rpf樣蛋白以及Rpf結構域(Rpfd)和三種突變體蛋白Rpfd1、Rpfd2和Rpfd3；明確了Rpf結構域及其突變體對恥垢分枝桿菌和臨床痰標本中MTB促生長作用；先後製備了MTB潛伏感染細胞模型和小鼠模型；明確了Rpf結構域及其突變體的溶酶體活性和細胞壁裂解活性；Rpfd1、Rpfd2和Rpfd3分別免疫小鼠後誘導產生的抗體水平均高於Rpfd免疫組，其中 Rpfd2 產生的抗體水平最高；免疫小鼠後1w， Rpfd、Rpfd1和Rpfd2免疫小鼠誘生的IFN-γ和IL-2水平均高於生理鹽水對照組；Rpfd及其突變體對MTB感染的保護力為Rpfd2＞ Rpfd ( Rpfd1) ＞Rpfd3。Rpfd、Rpfd1和Rpfd2免疫組小鼠肺部病理變化明顯輕於生理鹽水對照和Rpfd3免疫組，其病理變化程度與BCG免疫組無明顯差異。MTB感染小鼠在治療後11w和13w，Rpfd、Rpfd1、Rpfd2治療組肺部荷菌量明顯少於Rpfd3治療組和生理鹽水組（P＜0.05），但其對肺部MTB的控制沒有達到INH+RFP聯合治療組的效果。Rpfd、Rpfd1、Rpfd2治療組肺部肺泡壁增厚程度、肺臟實變程度及淋巴細胞浸潤程度均輕於對照組，Rpfd2有望用於TB的免疫治療。項目總計發表SCI論文6篇，中文核心期刊論文9篇，培養碩士研究生3名，獲得國家發明專利2項。
