《RhoA/ROCK通路在EPO促視網膜神經細胞軸突生長中的作用》是依託上海交通大學，由鐘一聲擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RhoA/ROCK通路在EPO促視網膜神經細胞軸突生長中的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：鐘一聲
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本研究採用上丘逆行標記成年大鼠視網膜神經節細胞後，進行球後視神經壓碎損傷在體實驗和谷氨酸毒性作用下視網膜培養離體實驗，套用視網膜鋪片、免疫組化、RT-PCR及Western blot等方法，研究促紅細胞生成素(EPO)促進受損的視網膜神經細胞軸突生長的情況、軸突生長相關蛋白-43(GAP-43)、促紅細胞生成素受體（EPOR）及活性RhoA、總RhoA、Rho相關激酶(ROCK1和ROCK2)的表達變化情況；同時研究ROCK抑制劑Y-27632和RhoA-siRNA對EPO促進視網膜神經細胞軸突生長及對活性RhoA、總RhoA、ROCK1和ROCK2表達的影響；探討RhoA/ROCK通路在EPO促神經細胞軸突生長中的作用及EPO促神經細胞軸突生長的作用機制，為發掘促進神經細胞軸突生長的藥物和治療靶點提供實驗依據，豐富視網膜神經損傷修復研究的內容。
結題摘要
許多眼科疾病（如青光眼、缺血性視神經病變、視網膜變性及外傷等）可導致視網膜神經細胞的損傷和死亡，從而引起永久性視功能障礙。由於成熟視網膜神經細胞高度分化，正常情況下受損死亡的神經細胞不能再生，因此促進瀕臨死亡的視網膜神經細胞的存活及其軸突再生，提高它們對損傷的耐受能力已成為當今國內外神經保護的研究熱點，也是眼科臨床迫切需要解決的問題。本研究採用上丘逆行標記成年大鼠視網膜神經節細胞後，進行球後視神經壓碎損傷在體實驗和谷氨酸毒性作用下視網膜培養離體實驗，套用視網膜鋪片、免疫組化、RT-PCR及Western blot等方法，研究了促紅細胞生成素(EPO)促進受損的視網膜神經細胞軸突生長的情況、軸突生長相關蛋白-43(GAP-43)及活性RhoA、總RhoA、Rho相關激酶(ROCK1和ROCK2)的表達變化情況；同時研究了ROCK抑制劑Y-27632對EPO促進視網膜神經細胞軸突生長及對活性RhoA、總RhoA、ROCK1和ROCK2表達的影響。主要研究結果顯示：（1）EPO和ROCK抑制劑Y-27632均能促進中度視神經鉗夾傷後視網膜神經節細胞（RGCs）的存活；（2）EPO和Y-27632均能促進大鼠中度視神經鉗夾傷後RGCs軸突通過鉗夾傷處生長，且EPO和Y-27632聯合用藥對RGCs軸突生長具有協同作用；（3）EPO和Y-27632能下調中度視神經鉗夾傷後視網膜中活性RhoA、ROCK1和ROCK2的表達，且兩藥聯合套用有協同作用，但對視網膜中總RhoA表達無影響；（4）谷氨酸能增加培養的視網膜中活性RhoA、ROCK1和ROCK2的表達； EPO能下調谷氨酸毒性作用下培養的視網膜活性RhoA、ROCK1和ROCK2的表達。以上研究結果提示：在視神經損傷後，RhoA/ROCK通路被激活，並參與了調控RGCs存活和軸突生長的過程，它是一種負向調節機制；抑制活性RhoA，進而抑制其下游物質ROCK1和ROCK2的活化，從而抑制RhoA/ROCK通路信號傳導，是EPO促進RGCs軸突生長的機制之一。本研究為發掘促進神經細胞軸突生長的藥物和治療靶點提供了實驗依據，同時為神經損傷的修復治療提供了理論依據和實驗基礎。
