《Reptin在逆轉卵巢癌紫杉醇化療耐藥中的作用及相關機制》是依託華中科技大學，由郝星擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Reptin在逆轉卵巢癌紫杉醇化療耐藥中的作用及相關機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：郝星
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
臨床上，卵巢癌患者對紫杉醇耐藥的現象時有發生，是導致化療失敗及復發的主要原因。眾所周知，紫杉醇主要通過作用於細胞紡錘體，阻斷細胞的正常分裂而達到抗腫瘤作用。有研究表明，細胞紡錘體檢測點（spindle assembly checkpoint,SAC）功能過早失活的腫瘤細胞對紫杉醇的耐藥性強於SAC功能正常的細胞株。我們前期研究提示：P31comet可以特異性介導SAC失活；並首次證實Reptin是調控P31comet功能的上游基因，但其機制國內外未見相關報導。我們推測Reptin可能通過P31comet來調節SAC的活性，進而影響機體對紫杉醇化療的敏感性。因此，本文將通過一系列體內外實驗來探討Reptin/P31comet基因在逆轉紫杉醇化療耐藥過程中的作用及機制，進一步揭示並完善SAC與紫杉醇化療耐藥發生的機制，為臨床上對紫杉醇化療耐藥的患者用藥提供新思路和藥物作用的新靶點。
結題摘要
課題前期進行了一些細胞株的篩選、質粒的構建、效應的驗證及藥物濃度的摸索，我們發現P31的缺失導致27%的Hela細胞有絲分裂期平均延長1.8個小時，然後這些細胞在有絲分裂期死去；剩下的P31-siRNA Hela細胞均不同程度的出現了有絲分裂期延長（~40min），然後這些細胞均能正常的完成細胞分裂細胞完成有絲分裂的時間延長，主要是中後期延長;同時，我們還發現實驗組中那27%的死於有絲分裂期的細胞中約50%的細胞死亡時處於有絲分裂中期。這些數據都說明P31在細胞完成正常有絲分裂的中後期是必不可少的,這與reptin缺失後細胞的表型是一致的。為了明確P31在這個過程中的角色，我們通過細胞學流式、免疫共沉澱及染色等一系列的研究，發現P31可以促進Mad2-Cdc20的解離進而導致MCC的失活，而且P31的這種作用是不依賴於蛋白水解酶活性的，也不依賴於cdc20泛素化的。我們在課題研究過程中發現Aurora激酶抑制劑VX680對細胞周期及增值有影響，並進行了相關的研究。通過研究，發現VX680可誘導細胞發生G2/M阻滯，同時發現八倍體細胞數目增多但是細胞凋亡卻沒有隨之增加。通過後續的蛋白印記實驗，發現在此過程中Bcl-2的表達的確沒有明顯改變，但是磷酸化P38的表達隨著增加，說明P38MAPK信號通路在此過程中發揮著一定的作用。為此，我們使用p38MARK的抑制劑birb796通過cck8試劑盒和克隆形成實驗檢測p38mark被抑制後vx680對細胞增殖的影響，實驗結果提示：birb796抑制p38mark的功能後，vx680對細胞增殖的抑制作用明顯增強。western blot和免疫染色結果均提示在此過程中，一些相關的凋亡的marker表達增加，提示：birb796可以增強vx680誘導的DNA損傷和宮頸癌細胞凋亡。我們也進行了體內試驗，均證實聯合使用Aurora激酶抑制劑vx680和birb796可以明顯增加凋亡基因的表達，明顯縮小小鼠的腫瘤體積，這一成果國內外尚未見報導，對於臨床化療耐藥的患者有積極的指導意義。
