RNAi外源篩靶技術是一種生物科學的技術實驗。
基本介紹
- 中文名：RNAi外源篩靶技術
- 性質：科學
- 類別：生物
- 屬於：實驗
RNAi實驗常見問題：,可靠的解決方案——RNAi外源篩靶,技術路線：,參考文獻：,
RNAi實驗常見問題：
1、 目的細胞暫時不易得到，比如說原代培養的細胞，稀有難得的細胞株或者目的細胞暫時還沒有到位；
2、 目的細胞轉染效率低（轉染效率在60%以下一般都認為轉染效率偏低）；
3、 目的細胞需要誘導才能表達靶基因；
4、 尚無靶基因的抗體。
可靠的解決方案——RNAi外源篩靶
技術路線：
1、製備至少三個靶點RNAi質粒；
2、構建靶基因重組真核表達質粒：靶基因與報告基因融合。因為siRNA是在核酸水平起效，所以，一般我們只克隆靶基因CDS區片段。
3、將各RNAi質粒分別與靶基因真核表達質粒瞬時共轉染入工具細胞。
（1）通過螢光顯微鏡檢測實驗組相對於陰性對照組（陰性對照siRNA+靶基因真核表達質粒）報告基因的表達水平下降程度；
（2）用報告基因抗體進行WesternBlot檢測，來間接反映靶基因siRNA的抑制效率。
參考文獻：
1. Takeshi Kawauchi, Kaori Chihama, Yo-ichi Nabeshima and Mikio Hoshino. Cdk5 phosphorylates and stabilizes p27kip1 contributing to actin organization and cortical neuronal migration. Nature Cell Biology, volume 8, number 1, January 2006:17-31.
2. Irena Crnkovic-Mertens, Julia Semzow, Felix Hoppe-Seyler, Karin Butz. Isoform-specific silencing of the Livin gene by RNA interference defines Livinβas key mediator of apoptosis inhibition in HeLa cells. J Mol Med (2006) 84: 232–240.
