《RNA干擾抑制STAT3表達以增強防齲DNA疫苗黏膜免疫效果研究》是依託武漢大學，由郭繼華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RNA干擾抑制STAT3表達以增強防齲DNA疫苗黏膜免疫效果研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：郭繼華
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本研究目的是構建小鼠STAT3基因的siRNA真核表達質粒，通過鼻黏膜途徑與靶向防齲DNA疫苗同時免疫，降低黏膜樹突狀細胞和黏膜上皮細胞的STAT3表達，促進黏膜樹突狀細胞的成熟，克服黏膜免疫耐受，加強靶向防齲DNA疫苗黏膜免疫效果。本研究將利用分子克隆技術和真核細胞siRNA表達技術，設計和構建小鼠STAT3基因的siRNA真核表達質粒並檢測其抑制STAT3基因表達的效率。通過鼻黏膜途徑與防齲DNA疫苗同時接種免疫，利用抗體和細胞因子檢測技術、定菌鼠模型，檢測該免疫方式誘導特異性抗體和抑制齲病的能力。以基因晶片、定量PCR等技術分析小鼠STAT3基因的siRNA真核表達質粒轉染樹突狀細胞後，被轉染的樹突狀細胞的基因表達變化，以免疫組化、原位雜交等技術分析該免疫方式對免疫局部和黏膜相關淋巴組織的細胞組成，微環境的影響，探討抑制STAT3表達增強防齲DNA黏膜免疫效果的可能機制。
結題摘要
齲病是人類最為常見的口腔疾病。變形鏈球菌是人類齲病的主要致病菌，其重要致齲毒力因子表面蛋白(surface protein antigen，PAc)和葡糖基轉移酶(glucosyltransferaes，GTFS)起了主要作用。我院已研製了多種防齲DNA疫苗，分別是針對PAc的pCIA-P、同時針對PAc和GTFs的pGLUA-P和增加了樹突狀細胞靶向分子的靶向防齲DNA疫苗pGJA-P，經黏膜途徑免疫定菌鼠後可以誘導產生唾液特異性SIgA抗體，具有防齲效果。目前防齲DNA疫苗的研究面臨的問題主要是如何進一步提高疫苗免疫原性。樹突狀細胞在特異性免疫反應的誘導中起了關鍵作用。在黏膜免疫系統微環境中，通常都含有較高濃度的來自黏膜上皮細胞，樹突狀細胞和調節性T細胞的IL-10，IL-6和TGF-β，形成了一個免疫抑制環境，STAT3屬於信號傳導與轉錄激活因子蛋白家族，研究證實腫瘤細胞中高表達的STAT3也促進了多種免疫抑制因子的表達包括IL-10和VEGF，從而抑制了樹突狀細胞的成熟和抗腫瘤免疫反應的誘導。我們期望抑制黏膜上皮細胞及樹突狀細胞STAT3基因表達，能夠降低黏膜微環境中免疫抑制因子的水平，有利於樹突狀細胞的激活和成熟，從而利於DNA疫苗特異性黏膜免疫反應的誘導。本研究根據課題思路設計了針對小鼠STAT3的核酸干擾序列，分別在不同細胞包括樹突狀細胞驗證有效性，當樹突狀細胞STAT3被敲低後，可以上調樹突狀細胞成熟表面分子CD40, CD80, CD86的表達，當使用LPS模擬抗原刺激樹突狀細胞時可以更加顯著增加CD40, CD80, CD86的表達。並構建了包含STAT3 siRNA的靶向防齲DNA疫苗，動物實驗驗證其有效性，並針對STAT3進行了相關機制研究。發現STAT3可以調控剪下因子的表達，而剪下因子影響樹突狀細胞的成熟，這可能是STAT3調控樹突狀細胞成熟並影響免疫反應的機制之一。我們同時對小鼠鼻黏膜相關淋巴組織的RNA進行了深度測序，發現了鼻黏膜特異性差異表達基因。本研究對於其他感染性疾病DNA疫苗的設計有借鑑意義，並對防治齲病提供了一種思路。
