《RNA干擾對長QT綜合徵突變基因L539fs/47-hERG沉默效應的研究》是依託西安交通大學，由李國良擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：RNA干擾對長QT綜合徵突變基因L539fs/47-hERG沉默效應的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李國良
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
遺傳性長QT綜合徵（LQTS）是一種常染色體顯性遺傳性心臟病，以反覆發作的暈厥，抽搐，甚至猝死為臨床特徵。hERG基因突變與2型LQTS（LQT2）相關。RNA干擾（RNAi）是一種轉錄後基因沉默現象。RNAi可以特異性沉默某種與疾病相關的基因，發揮治療潛能。本課題組前期發現一複雜突變基因L539fs/47-hERG，該突變通過負顯性抑制作用導致hERG通道表達和功能異常。本研究擬設計合成4條針對L539fs/47-hERG的靶向小干擾RNA（siRNA）序列，然後利用PCR、Western blot等實驗篩查出對L539fs/47-hERG具有敏感特異沉默效應的siRNA，最後利用雷射共聚焦顯微鏡、Western blot和膜片鉗技術觀察篩查出的siRNA能否糾正L539fs/47-hERG對WT-hERG通道的負顯性抑制作用，探討利用RNAi治療LQTS的可能性。
結題摘要
遺傳性長QT綜合徵（LQTS）是一種常染色體顯性遺傳性心臟病，以反覆發作的暈厥，抽搐，甚至猝死為臨床特徵。hERG基因突變與2型LQTS（LQT2）相關。RNA干擾（RNAi）是一種轉錄後基因沉默現象。RNAi可以特異性沉默某種與疾病相關的基因，發揮治療潛能。本課題組前期發現一複雜突變基因L539fs/47-hERG，該突變通過負顯性抑制作用導致hERG通道表達和功能異常。本研究擬探討能否利用RNAi糾正L539fs/47-hERG對WT-hERG通道的負顯性抑制作用，並將RNAi與氨基糖苷類藥物對突變通道的糾正潛能進行了對比。本研究針對L539fs/47-hERG設計了4條靶向小干擾RNA（siRNA）序列，利用PCR篩選出敏感性和特異性最高的1條。在膜片鉗功能驗證部分，在WT-hERG和MT-hERG（WT與MT質粒共轉染模擬的雜合體）組分別檢測到典型的hERG樣電流，但是在MT-hERG+shRNA（WT、MT與shRNA質粒共轉染）和MT-hERG+NC-shRNA（WT、MT與NC-shRNA質粒共轉染）均未能檢測到電流。而在氨基糖苷類藥物的干預研究中，全細胞膜片鉗結果提示WT-hERG、WT+L539fs/47-hERG在慶大黴素干預下的峰值尾電流增加值分別為10.00pA/pF、14.41pA/pF，增加率分別為18.22%、62.84%。雷射共聚焦觀察結果提示WT、L539fs/47+WT組在慶大黴素干預後，通道蛋白在胞膜表達均增加，其中L539fs/47+WT組通道蛋白在胞質的滯留得到改善。因此得出結論：siRNA不能改善在異源表達細胞株HEK293細胞上表達的雜合突變通道（WT與MT質粒共轉染模擬的雜合體）的功能，這可能與WT、MT與NC-shRNA質粒共轉染時，轉染效率低下有關。而氨基糖胺類藥物慶大黴素可以改善雜合L539fs/47-hERG通道的表達和功能。
