《RGT肽及相關分子調控血小板功能的分子機制研究》是依託上海交通大學，由奚曉東擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RGT肽及相關分子調控血小板功能的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：奚曉東
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
血小板活化聚集是血栓形成的關鍵原因，而整合素αIIbβ3是血小板活化聚集的最終共同通路，因此成為抗血栓研究的重點。前期工作發現，β3胞漿段模擬肽myr-RGT可與Src的SH3結合，通過解離β3與Src的相互作用而阻斷外向內信號轉導。這形成了一種新的抗血栓策略，可在保留血小板初期止血功能的基礎上抑制其促血栓形成的能力，其套用前景已引起學術界重視。有關myr-RGT調控血小板功能的分子機制仍有一些關鍵環節亟待闡述。本項目旨在對RGT肽的作用機理進行下列深入探討：一、RGT肽發揮干擾Src-β3相互作用的功能是否為膜靶定依賴性；二、Src與RGT肽結合後其包括活性在內的重要性質是否會發生改變；三、Src能否直接磷酸化β3胞漿段的Y747、Y759。上述研究將有助於更深入了解整合素αIIbβ3信號轉導的分子機制，及更完整評估基於 RGT肽作用的抗血栓策略並對其後續套用研究提供指向性的判斷依據。
結題摘要
我們前期工作發現，整合素β3胞漿段模擬肽myr-RGT通過與Src的SH3結合，抑制β3與Src的相互作用，實現特異性阻斷血小板整合素β3介導的外向內信號轉導，從而形成一種新的抗血栓策略，在保留血小板初期止血功能（血小板內向外信號介導）的基礎上抑制其促血栓形成的能力（血小板外向內信號介導），其套用前景已引起學術界重視。 本項目的研究進一步完善了對外源性RGT肽的作用機制的了解，主要包括：一、胞內游離的RGT肽即可干擾Src-β3相互作用。二、形成Src-β3複合體是整合素β3介導的Src活化（Src Y416磷酸化，Src Y527去磷酸化）的基礎，外源性RGT肽通過解離Src-β3複合體，抑制整合素β3介導的Src活化。同時，活化後的Src對整合素β3胞漿段的Y747、Y759的磷酸化並不依賴Src-β3複合體。三、我們進一步證實RGT肽並不直接影響Src激酶活性。同時，我們還套用Bioflux200檢測了在流動狀態下，通過形成不同剪下力模擬不同直徑的血管以及受阻的血管中血栓形成的動態變化。此外，還構建了模擬鈣蛋白酶（Calpain）酶解β3產生的一系列截短突變體，在CHO細胞以及小鼠體內研究了β3截短突變（β3Δ741、β3Δ747、β3Δ754、β3Δ759、以及β3ΔNITY）在血小板雙向信號轉導中的作用以及與胞漿相關蛋白分子的相互作用。本項目的實施使我們更深入了解整合素αIIbβ3信號轉導的分子機制，及更完整評估基於RGT肽作用的抗血栓策略並對其後續套用研究提供更全面的理論支持。
