《RBP-4對豬卵泡顆粒細胞增殖的影響及其機理研究》是依託吉林大學，由周虛擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RBP-4對豬卵泡顆粒細胞增殖的影響及其機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周虛
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
視黃醇結合蛋白-4（RBP-4）是一種低分子量的載脂蛋白，其主要作用是結合和轉運維生素 A。近年來國內外文獻報導了RBP-4在繁殖過程中某些方面的作用，如促進子宮生長和胚胎髮育。本課題組曾在國際上首次報導了豬囊腫卵泡液中含有高濃度的RBP-4，還發現豬卵泡顆粒細胞上表達RBP-4及其受體，體外培養的豬顆粒細胞可以分泌產生RBP-4。然而，RBP-4對卵泡發育的作用尚不清楚，對卵泡顆粒細胞的調節尚無報導。因此，本項目通過基因晶片、siRNA、細胞轉染等技術，研究RBP-4在豬卵泡顆粒細胞增殖中的作用、下游基因、信號轉導機制，為闡明RBP-4在母豬卵泡發育中的作用提供理論依據，期望為母豬卵泡囊腫的治療提供新的靶點。
結題摘要
視黃醇結合蛋白-4（RBP-4）是一種低分子量的載脂蛋白，其主要作用是結合和轉運維生素A。近年來國內外文獻報導了RBP-4在繁殖過程中某些方面的作用，如促進子宮生長和胚胎髮育。 為探明RBP-4在豬卵泡發育中的調節作用，本項目根據前期研究基礎，以豬卵泡顆粒細胞為研究對象，利用不同實驗手段，從不同角度，研究了RBP-4對豬卵泡顆粒細胞增殖的影響。 （1）研究了RBP-4在豬卵巢組織中的分布及在不同大小卵泡中的表達模式。免疫組化和PCR方法證實了豬卵泡顆粒細胞和內膜細胞表達RBP-4，而卵母細胞不表達。而且qRT-PCR和western blotting檢測均證明，大卵泡RBP-4表達量顯著高於中、小卵泡。 （2）研究了RBP-4與促性腺激素（FSH、LH）在豬卵泡顆粒細胞中的相互作用。qRT-PCR和western blotting檢測發現，FSH、LH能促進豬卵泡顆粒細胞中RBP-4的表達，同時，RBP-4能夠促進FSHR、LHR的表達。說明RBP-4與促性腺激素具有相互作用，二者協同促進顆粒細胞生長。 （3）研究了豬卵泡顆粒細胞過表達RBP-4後，對下游microRNA的調節。microRNA高通量測序篩選出81個差異miRNA，預測出7562個靶基因，其中資料庫中已有記載的豬源差異miRNA為8個。其中上調3個：miR-142-3p_R2-22L22 、miR-18b_R1-16L23、 miR-32_R1-21L21，下調5個：miR-148a-5p_R1-21L22、miR-193a-3p、miR-378b-3p_R1-18L21、 miR-7857-3p_R1-22L22、ssc-miR-9788-3p_R1-15L22。挑選6個差異miRNA進行了驗證，同時進一步研究了miRNA-193a-3p對顆粒細胞增殖的影響機制。 （4）研究了豬卵泡顆粒細胞過表達RBP-4後，對下游基因的調節。轉錄組高通量測序篩選出113個差異mRNA，71個基因上調，42個基因下調，這些基因參與多種細胞功能，進一步驗證了ITGA5、MMP1和IGFBP5三個基因，並且重點研究了IGFBP5對細胞增殖影響的機制。 （5）利用原核表達系統體外表達了豬RBP-4蛋白，製作了RBP-4多抗，同時研究了RBP-4對豬卵母細胞體外成熟的研究。成功構建了豬RBP-4蛋白原核表達載體，成功表達
