《Polyphosphate 調節sigma 80 與幽門螺桿菌致胃癌的關係研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由楊詔旭擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Polyphosphate 調節sigma 80 與幽門螺桿菌致胃癌的關係研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：楊詔旭
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
世界超過50%的人口感染幽門螺桿菌。大多數胃炎、胃潰瘍是由幽門螺桿菌引起，胃癌也與其密切相關。然而在絕大多數感染者中，僅出現無症狀胃炎，並不需要根除幽門螺桿菌。因此要制定正確的治療策略，就必須更好的理解幽門螺桿菌的致病機制。幽門螺桿菌致病的關鍵因素，在於多種致病基因的存在與表達激活。我們希望通過研究幽門螺桿菌的轉錄調控，找到調控致病基因表達的鑰匙。以進一步理解幽門螺桿菌如何在不同的條件下，表達致病基因以適應宿主內不斷改變的內環境，逃避免疫應答，導致胃潰瘍、胃癌。前期，我們在美國國家腫瘤研究所的研究發現，Polyphosphate通過調節sigma 80（幽門螺桿菌最主要的轉錄因子），調控轉錄。而這種調控與幽門螺桿菌適應不良環境，逃避免疫應答密切相關。本項目將在前期實驗基礎上進一步明確Polyphosphate 調節sigma 80對轉錄下游基因的影響，及這種調節與幽門螺桿菌致病性的關係。
結題摘要
幽門螺桿菌(H.pylori)與胃癌密切相關。前期我們發現，Polyphosphate（PolyP）可修飾sigma 80（H.pylori主要轉錄因子），可能調控H.pylori基因轉錄。擬進一步研究該現象，探索PolyP修飾sigma 80是否與H.pylori的致癌性相關。項目進展如下： 1.體外表達純化H.pylori合成與降解PolyP的關鍵酶PPK及GPPA,功能分析明確PPK具合成PolyP及轉化PolyP到ATP的雙向酶功能。GPPA則降解PolyP，經GPPA處理的PolyP不再修飾sigma 80。 2.構建敲除PPK基因（ΔPPK）及敲除sigma 80 N端結合PolyP位點（σ80 N端突變型）的兩種突變體。通過克隆形成實驗等發現，兩種突變體（阻斷PolyP修飾Sigma 80）較野生型H.pylori G27在巨噬細胞記憶體活下降 。雙染色技術發現，兩種突變體較野生型H.pylori更易被巨噬細胞吞噬，從而更易被清除。 3.與細胞共培養過程中發現，野生型G27出現PolyP修飾Sigma 80現象，提示其與H.pylori侵襲細胞相關。而ΔPPK及σ80 N端突變型則不出現PolyP修飾Sigma 80的現象。兩種突變體的細胞毒性較野生型明顯下降，共培養72h後細胞存活率明顯高於野生型，細胞空泡化程度明顯低於野生型。 4.發現在ΔPPK及σ80 N端突變型中VacA、FlaA及FlaB的表達顯著低於野生型G27，並通過Western blot及RT-PCR證實，而上述三種基因分別與H.pylori導致的細胞空泡化及侵襲性相關。 5.發現胃癌患者分離的H.pylori合成PolyP的能力更高。分別在胃癌及胃炎患者中分離H.pylori，在血清充足及無血清條件下分別培養，結果發現在兩種條件下，胃癌患者組中PolyP積聚顯著高於胃炎患者組。 6.在胃癌及胃炎患者分離的H.pylori中，檢測胃癌相關基因（ CagA, CagE ， VacA S1，BabA2，Ice1）的表達，發現CagE ，VacA S1a，BabA2在胃癌組中的陽性表達明顯高於胃炎組 。而PolyP的高合成則與胃癌相關基因CagE, VacA S1a，BabA2的陽性表達正相關 。 項目完成預定計畫，發表中文核心期刊3篇，SCI 1篇,2篇英文文章整理投稿中。
